慢性移植片対宿主病マウスモデルを用いた角膜輪部機能不全と間葉上皮転換の関連の検討

使用慢性移植物抗宿主病小鼠模型检查角膜缘功能障碍与间充质上皮转化之间的关系

基本信息

批准号：
19K18902
负责人：
福井正樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

２０２２年度もＣＯＶＩＤー１９感染の影響を受け、実験の進行が予定通り進めなかった。また、当初実験予定であった慶應義塾大学での慢性移植片対宿主病マウスモデルの作成が困難となり、自施設での研究を遂行した。本年度もアルカリ化学外傷モデルマウスを作成し、そのＢｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ－７の発現の評価を試みた。昨年度開発した角膜上皮細胞のみ回収して解析を行う方法を用いてアルカリ化学外傷モデルマウスの角膜上皮細胞からのｍＲＮＡ抽出を検討したところ、安定して採取が行えるようになった。その上でreal time PCR解析を行った。アルカリ化学外傷眼では対照群である非アルカリ化学外傷眼である僚眼に比べ、Ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ－７のｍｅｓｓｅｎｇｅｒ　ＲＮＡ発現量が０．３９１倍（ｔ検定　ｐ＝０．０１１）と有意に低下していた。これを裏付けるために角膜組織におけるＢｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ－７の免疫染色による証明を行ったが、凍結切片での免疫染色性が悪く、十分な根拠となっていない。２０２３年度に免疫染色法を条件検討し、組織学検討によるＢｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ－７の発現の証明を行っていきたい。この証明がされると、角膜輪部機能不全における上皮間葉転換の関与、またそこに注目した間葉上皮転換を利用した治療法の確立につながると考える。

该实验还受到2022年Covid-19感染的影响，实验的进展未按计划进行。此外，很难在Keio University创建慢性移植物抗宿主病的小鼠模型，该模型最初计划进行实验，并在我们自己的设施进行了研究。今年，我们还创建了一种碱性化学创伤模型小鼠，并试图评估骨形态发生蛋白7的表达。当我们使用去年开发的方法从碱性化学创伤小鼠模型的角膜上皮细胞中提取mRNA提取时，涉及收集和分析它们时，我们能够获得稳定的收集。然后进行实时PCR分析。在碱性化学创伤眼中，与共同作者的眼睛相比，骨形态发生蛋白7的表达水平显着降低至0.391次（t检验，p = 0.011），而不是非碱性化学创伤眼睛，即对对照组。为了支持这一点，我们通过对角膜组织中骨形态发生蛋白7的免疫染色来证明，但是冷冻切片中的免疫染色性较差，使其不足。在2023财年，我们想研究免疫染色的条件，并通过组织学研究证明骨形态发生蛋白7的表达。这些证据将导致上皮 - 间质转变参与边缘功能障碍，并建立利用间质上皮过渡的治疗方法，重点是这一点。