ルシフェラーゼ発現トランスジェニックマウスを用いた新規皮膚感作性試験法の構築

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近年、動物愛護の観点から動物実験の適切な施行の国際原則である3R（Replacement・Reduction・Refinement）の推進が強く求められているが、動物を用いない代替法のみで化学物質等の安全性を評価するには問題点が多く、Replacementを除く2Rを強く反映したin vivo試験法の開発が必要である。経済協力開発機構（OECD）のテストガイドライン（TG）に掲載されているLocal Lymph Node Assay (LLNA)は、化学物質等の皮膚感作性のリスクをマウスで予測できる優れた方法である。しかし従前の試験法よりも実験動物へのストレスは少ないものの、最終的に動物を屠殺しなければならず、動物愛護の面でまだ改善すべき問題が多い。本研究では、我々が独自に作成した、リンパ球でルシフェラーゼを高発現しているトランスジェニック（Luc-TG）マウスとin vivoイメージング技術を用いた試験法を新たに確立し、この難題解決を目指す。2020年度は、既知の感作性物質を用いて、Luc-TGマウスのLLNAにおける応答性を確認した。本来OECD-TG429において、LLNAで使用するマウス系統はCBA/CaあるいはCBA/J系が推奨されている。しかし我々が作製したLuc-TGマウスは、免疫研究や免疫毒性試験のツールとして用いるためにBALB/c系統に戻し交配している。そのため、このLuc-TGマウスを用いたLLNAにより、化学物質の皮膚感作性が正確に評価できるかを検討した。その結果、今回用いた極強度感作性物質の2,4-ジニトロクロロベンゼン（DNCB）、軽度感作性物質のα-ヘキシルシンナミックアルデヒド（HCA）ともに既報と同等の結果を示した。よって、Luc-TGマウスはLLNAにおいて化学物質の皮膚感作性を正確に評価できることが示された。