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Role of effector proteins secreted by Cladosporium fulvum againist the mycoparasitic invasion

黄枝孢菌分泌的效应蛋白对抗真菌寄生虫入侵的作用

基本信息

批准号：
20H02993
负责人：
飯田祐一郎
金额：
$ 11.4万
依托单位：
Setsunan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

植物病原菌は宿主植物の防御反応を抑制するために、エフェクターと呼ばれる低分子タンパク質を病原力因子として分泌する。一方、抵抗性遺伝子をもつ植物は、エフェクターを介して病原菌の侵入を感知するため、エフェクターは植物の抵抗性誘導因子としても機能してしまうという二面性を持っている。そのためエフェクターは、病原菌と植物との相互作用においてのみ重要とされてきた。本研究では、重要病原菌であるトマト葉かび病菌(Cladosporium fulvum)のエフェクターが、植物だけでなく他の微生物が分泌する分解酵素も抑制すること、すなわち、病原菌エフェクターが拮抗微生物に対する防御応答にも重要な役割を果たす、という「第三の機能」について、トマト葉かび病菌と菌寄生菌Dicyma pulvinataを用いて解析する。本年度は、トマト葉かび病菌のエフェクターを用いた共免疫沈降法で、新たに相互作用することが示唆された菌寄生菌D. pulvinataのタンパク質を検出し、質量分析によって解析した。その結果、複数のバンドが同一の加水分解酵素をコードすることが明らかとなった。分泌シグナルを除去し、コドンを最適化した同定タンパク質GLC74を大腸菌で異種発現・精製したところ、予想される分子量の組換えタンパク質が得られた。またトマト葉かび病菌エフェクターとGLC74の相互作用を確認した。さらに、形質転換系を用いて作出したD. pulvinata遺伝子破壊株の菌寄生性における機能解析をおこなった。

Plant pathogens inhibit the defense response of host plants and secrete low molecular weight virulence factors. A resistance inducer is a plant that detects the invasion of pathogens, and a resistance inducer is a plant that maintains a dihedral function. The interaction between pathogenic bacteria and plants is important. In this study, we analyzed the role of important pathogens, Cladosporium fulvum, plant pathogens, and other microorganisms in the secretion of enzyme inhibitors. This year, we used the immuno-sedimentation method to detect the interaction between the bacteria and parasites. Pulvinata's quality analysis and quality analysis As a result, a plurality of enzymes are present in the same enzyme. Excretion, removal, optimization, characterization, GLC74, heterologous production, purification, and expected molecular weight composition The interaction between GLC74 and the pathogen was confirmed. This time, the physical and qualitative change system is used to make the D. Analysis of the parasitic function of pulvinata strains