極低温超偏極固体NMRによる蛋白質の動的機能構造解析法の開発とGPCRへの応用

低温超极化固态NMR蛋白质动态功能结构分析方法的开发及其在GPCR中的应用

基本信息

  • 批准号:
    20H03193
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 11.48万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 财政年份:
    2020
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2020-04-01 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

最終標的蛋白質のGPCR(β2アドレナリン受容体)について、無細胞系発現・精製・調製法を確立した。DOPC-コレステロール膜リポソームへの再構成、ラジオリガンドアッセイによるリガンド結合活性も確認した。固体NMR試料管へのパッキングを向上するのに、脂質量の最適化が必要であった。リガンドの結合に伴う構造変化を最も反映するヒンジ部位への選択的同位体標識スキームも設計し、主に主鎖構造アンサンブル平衡の観測に供する。これと並行してセレノメチオニン選択標識法も確立し、プロトン観測2次元 77Se-NMR信号の解析から、側鎖の構造アンサンブルに迫るアプローチも実行、学会発表した。GPCR以外の分子系で、やはり構造アンサンブルの動的平衡が機能発現に関与するモデル系として多剤排出系転写因子QacRの発現、精製も行った。QacRの微結晶状試料について、13C相関スペクトルの解析から動的平衡の存在が側鎖信号に捉えられることを見出し、学会発表した。高次元・残基間相関用のラジオ波パルス列も完成し、観測信号の質向上を目指した最適化を行った。装置の長期・超・安定性を得るために、微小な磁場不均一性を補正するシム電源の改良が必要であることも見出した。構造アンサンブルの計算科学的解析法については、データベースマイニングに則る基礎的な手法を確立し、モデル系αシヌクレインの液液相分離(LLPS)状態ドロップレット中の構造アンサンブル解析に応用した。成果は複数の学会発表、また論文として公表した。よりGPCRの解析に有用な解析法に発展させるため、DFTに基づく化学シフト計算をデータ解析に直接組み込む改良も行った。以上より、モデル系、標的蛋白質試料ともに試料調製、DNP-固体NMR測定法、解析法、いずれについても計画に沿って順調に発展させ、膜蛋白質の二重膜中、構造アンサンブル解析の基盤を作った。
The most important protein, GPCR (β 2), cell line, cell line and cell line. The DOPC- film is used to improve the quality of the film. The activity of the film is confirmed. The solid NMR material pipe is in good condition, and the amount of fat is the most necessary. The combination of the system and the partner system most effectively reflects the identity of the selected part of the system, and the host creates a balance device for the system. At the same time, make sure that the header is set up, that the two-dimensional 77Se-NMR signal is parsed, and that you are forced to do so, and learn to read the table. In addition to the GPCR, the balance mechanism of the molecular system and the system can be detected and analyzed. The QacR factor is detected and analyzed. QacR microcrystalline materials and 13C phase micrographs are used to analyze the balance of motions. there is a signal to catch the signals, and learn to read the table. The high-dimensional residual phase is completed by the transmission wave train, and the signal is directed up to the most accurate line. Long-term stability of the device, small magnetic field heterogeneity is necessary to improve the power source. In order to calculate the analytical method of science, the method of determining the accuracy of the computer science, the method of determining the accuracy of the computer, the method of determining the accuracy of the system, and the method of liquid-liquid separation (LLPS) in the state of liquid-liquid separation (LPLD). The results of the "plural" society "table," the text "public table". GPCR analysis is useful in the development of chemical calculations, DFT chemistry, chemical calculation, and analysis. The above materials, DNP- solid-state NMR, analytical methods, membrane proteins in double membranes, membrane proteins in double membranes, and analytical methods.

项目成果

期刊论文数量(29)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Efficiency analysis of helium-cooled MAS DNP: case studies of surface-modified nanoparticles and homogeneous small-molecule solutions
  • DOI:
    10.1039/d0cp05658h
  • 发表时间:
    2021-02-28
  • 期刊:
  • 影响因子:
    3.3
  • 作者:
    Matsuki, Yoh;Kobayashi, Takeshi;Fujiwara, Toshimichi
  • 通讯作者:
    Fujiwara, Toshimichi
生体系メソスケール構造研究に向けたDNP-NMR法
用于生物系统介观结构研究的 DNP-NMR 方法
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    澤村友哉;堀井和広;椎名貴彦;山口裕嗣;山中章弘;志水泰武;松木 陽
  • 通讯作者:
    松木 陽
細胞内構造生命科学にむけたDNP-MAS-NMRの装置・方法論開発と応用
细胞内结构生命科学DNP-MAS-NMR设备和方法的开发和应用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yamaoki;Y.;Nagata;T.;Kondo;K.;Sakamoto;T.;Takami;S.;and Katahira;M.;松木 陽
  • 通讯作者:
    松木 陽
極低温MAS-DNP固体NMRによる多剤結合転写因子QacRの構造分布解析
低温 MAS-DNP 固态 NMR 分析多药结合转录因子 QacR 的结构分布
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    猪熊 壽;原田俊之;瀧口朝陽;永田健樹;佐伯陽平;奥山一葉;内山莉緒;前澤誠希;チェンバーズ ジェームズ;内田和幸;田巻初,藤原敏道,松木陽
  • 通讯作者:
    田巻初,藤原敏道,松木陽
動的核偏極(DNP)による高感度・高分解能固体NMR法-装置と方法論の開発と応用
使用动态核极化(DNP)的高灵敏度和高分辨率固态NMR方法 - 设备和方法的开发和应用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Ehara Haruhiko;Kujirai Tomoya;Shirouzu Mikako;Kurumizaka Hitoshi;Sekine Shun-ichi;松木 陽
  • 通讯作者:
    松木 陽
{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ patent.updateTime }}

松木 陽其他文献

Advanced Instrumentation for DNP-enhanced Solid-State NMR
用于 DNP 增强固态 NMR 的先进仪器
  • DOI:
  • 发表时间:
    2017
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    古谷祐詞;Akkapol Suea-Ngam;松木 陽
  • 通讯作者:
    松木 陽
Advanced Instrumentation for High-Field DNP for Sensitivity-Enhanced Biological Solid-State NMR
用于高场 DNP 的先进仪器,用于灵敏度增强的生物固态 NMR
  • DOI:
  • 发表时间:
    2016
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    古谷祐詞;Akkapol Suea-Ngam;松木 陽;古谷祐詞;松木 陽;古谷祐詞;松木 陽
  • 通讯作者:
    松木 陽
ATP生産関連膜蛋白質系の構造と機能解析
与 ATP 产生相关的膜蛋白系统的结构和功能分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2011
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    阿久津秀雄,原 利明;佐藤 毅;池田恵介;植田啓介;松木 陽;池上貴久;戸所泰人;鈴木俊治,相本三郎;吉田賢右;出村 誠;藤原敏道
  • 通讯作者:
    藤原敏道
Improving High-Field DNP and its Applications
改进高场 DNP 及其应用
  • DOI:
  • 发表时间:
    2016
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    古谷祐詞;Akkapol Suea-Ngam;松木 陽;古谷祐詞;松木 陽
  • 通讯作者:
    松木 陽
Novel methods for molecular structural analysis by high-resolution solid-state NMR spectroscopy utilizing the double-quantum dipolar interactions
利用双量子偶极相互作用的高分辨率固态核磁共振波谱进行分子结构分析的新方法
  • DOI:
  • 发表时间:
    2003
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    松木 陽
  • 通讯作者:
    松木 陽

松木 陽的其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

{{ truncateString('松木 陽', 18)}}的其他基金

GPCRと共役蛋白質の構造アンサンブル相関-擬細胞内環境DNP固体NMRの確立
GPCR与偶联蛋白之间的结构系综相关性-伪细胞内环境的建立DNP固态NMR
  • 批准号:
    23K27115
  • 财政年份:
    2024
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
GPCRと共役蛋白質の構造アンサンブル相関-擬細胞内環境DNP固体NMRの確立
GPCR与偶联蛋白之间的结构系综相关性-伪细胞内环境的建立DNP固态NMR
  • 批准号:
    23H02422
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)

相似国自然基金

适用膜蛋白-配体复合物结构测定的1H和19F距离约束检测的固体NMR方法研究
  • 批准号:
    JCZRYB202500181
  • 批准年份:
    2025
  • 资助金额:
    0.0 万元
  • 项目类别:
    省市级项目
锌基复合金属氧化物催化CO2加氢反应的固体NMR谱学研究
  • 批准号:
    22372160
  • 批准年份:
    2023
  • 资助金额:
    50 万元
  • 项目类别:
    面上项目
超极化增强的固体NMR方法及在分子筛催化不饱和醛选择性加氢反应中的应用研究
  • 批准号:
    22372179
  • 批准年份:
    2023
  • 资助金额:
    50 万元
  • 项目类别:
    面上项目
分子筛上生物质加氢脱氧反应协同催化作用的固体NMR研究
  • 批准号:
  • 批准年份:
    2022
  • 资助金额:
    54 万元
  • 项目类别:
    面上项目
光功能MOFs材料的构效关系及荧光检测水体污染物机理的高场固体NMR研究
  • 批准号:
  • 批准年份:
    2021
  • 资助金额:
    56 万元
  • 项目类别:
    面上项目
表面增强的二维固体NMR方法及在γ-Al2O3活性位研究中的应用
  • 批准号:
  • 批准年份:
    2021
  • 资助金额:
    60 万元
  • 项目类别:
单链高分子纳米粒子及其纳米复合材料微观结构和动力学的固体NMR研究
  • 批准号:
  • 批准年份:
    2021
  • 资助金额:
    60 万元
  • 项目类别:
    面上项目
高压LiCoO2的固体NMR与EPR研究
  • 批准号:
  • 批准年份:
    2021
  • 资助金额:
    60 万元
  • 项目类别:
    面上项目
高分子玻璃化转变机理的固体NMR研究
  • 批准号:
  • 批准年份:
    2020
  • 资助金额:
    63 万元
  • 项目类别:
    面上项目
真实反应条件下分子筛Brønsted酸特性的固体NMR和理论研究
  • 批准号:
    22002174
  • 批准年份:
    2020
  • 资助金额:
    24.0 万元
  • 项目类别:
    青年科学基金项目

相似海外基金

Development of new methods for protein structure determination by solid state NMR
开发固态核磁共振测定蛋白质结构的新方法
  • 批准号:
    466956-2014
  • 财政年份:
    2014
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    University Undergraduate Student Research Awards
Low Temperature Solid-State NMR Technologies for Protein Structure Determination
用于蛋白质结构测定的低温固态核磁共振技术
  • 批准号:
    8710289
  • 财政年份:
    2013
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
Low Temperature Solid-State NMR Technologies for Protein Structure Determination
用于蛋白质结构测定的低温固态核磁共振技术
  • 批准号:
    8575754
  • 财政年份:
    2013
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
Solid-state NMR studies of protein structure, protein-lipid interactions and domain formation in model membranes
模型膜中蛋白质结构、蛋白质-脂质相互作用和结构域形成的固态核磁共振研究
  • 批准号:
    184177-2005
  • 财政年份:
    2009
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Discovery Grants Program - Individual
Determination of protein structure by solid-state NMR spectroscopy
通过固态核磁共振波谱测定蛋白质结构
  • 批准号:
    329326-2006
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Postdoctoral Fellowships
High-Field, Wide-Bore Solid-State NMR Spectrometer for Membrane Protein Structure
用于膜蛋白质结构的高场、大孔径固态核磁共振波谱仪
  • 批准号:
    7497404
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
Solid-state NMR studies of protein structure, protein-lipid interactions and domain formation in model membranes
模型膜中蛋白质结构、蛋白质-脂质相互作用和结构域形成的固态核磁共振研究
  • 批准号:
    184177-2005
  • 财政年份:
    2008
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Discovery Grants Program - Individual
Determination of protein structure by solid-state NMR spectroscopy
通过固态核磁共振波谱测定蛋白质结构
  • 批准号:
    329326-2006
  • 财政年份:
    2007
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Postdoctoral Fellowships
Determination of protein structure by solid-state NMR spectroscopy
通过固态核磁共振波谱测定蛋白质结构
  • 批准号:
    329326-2006
  • 财政年份:
    2006
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Postdoctoral Fellowships
Solid-state NMR studies of protein structure, protein-lipid interactions and domain formation in model membranes
模型膜中蛋白质结构、蛋白质-脂质相互作用和结构域形成的固态核磁共振研究
  • 批准号:
    184177-2005
  • 财政年份:
    2006
  • 资助金额:
    $ 11.48万
  • 项目类别:
    Discovery Grants Program - Individual
{{ showInfoDetail.title }}

作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了