コンパートメント特異的なシナプスプロテオミクス解析法の確立

区室特异性突触蛋白质组学分析方法的建立

• 批准号: 20H03340
• 负责人: 平野 恭敬
• 金额: $ 11.81万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03340/
• 关键词: シナプス; ショウジョウバエ; プロテオミクス

過去の研究の蓄積により、複雑な脳神経ネットワークの構造が紐解かれ、個々の神経の特異的役割が明らかになってきた。次世代の中心的問いの一つとなるは、特異的な役割を果たすために、さらにミクロの単位である個々のシナプスはどのようにシグナル分子を使い分けているか、である。脳神経回路では、層構造に代表されるように局在化した投射領域（ここではコンパートメントと呼ぶ）が見られ、コンパートメント間にはシナプスの生化学的差異があることが予想される。しかしながらその解析法がないために、シナプス間のシグナル分子の使い分けについてほとんど知られていない。本研究では、ショウジョウバエのキノコ体神経をモデルとして、コンパートメント特異的なシナプスの生化学的特性を解析する手法を開発し、シナプス間におけるシグナル分子の使い分けを明らかにする。本年度はキノコ体の特定コンパートメントに存在する前シナプス、後シナプスを単離するために必要なショウジョウバエ系統を複数確立し、各特性を免疫組織染色、免疫沈降法により条件検討を行った。シナプス間を標識するＧＲＡＳＰ法を改変し、２０以上のショウジョウバエ系統作成し、その中からＧＲＡＳＰ効率がよく、免疫沈降の効率が良く、かつ非特異的な沈降の少ないものを選択した。さらにシナプス分画からの免疫沈降を行うための手法の最適化を行った。現在までに、コンパートメント特異的シナプスを単離するためのショウジョウバエ系統の選択を完了し、免疫沈降の最適化を終了した。

In the past, the accumulation of research, complex structure of the brain, and the specific structure of the brain have been studied. The central question of the next generation is whether or not the specific service is effective. The structure of the neural loop represents the biochemical differences between the two regions. The analysis method of this paper is to analyze the relationship between the two factors. In this study, we developed a method for analyzing the biochemical properties of the specific molecules in the human brain. This year, we conducted a study on the conditions for the establishment of a number of necessary systems for the identification of specific species, including immunostaining and immunoprecipitation. The GRASP method is modified for identification of time, more than 20 times for system construction, better GRASP efficiency, better immune sedimentation efficiency, and less non-specific sedimentation. The method of optimization of immune sedimentation is carried out in the following ways: Now, the selection of the system and the optimization of immune sedimentation are complete, allowing us to provide a single access to the Konpa-Mentation-specific system.

项目成果

Rpd3/CoRest-mediated activity-dependent transcription regulates the flexibility in memory updating in Drosophila.

• DOI: 10.1038/s41467-021-20898-x
• 发表时间: 2021-01-27
• 期刊: Nature communications
• 影响因子: 16.6
• 作者: Takakura M;Nakagawa R;Ota T;Kimura Y;Ng MY;Alia AG;Okuno H;Hirano Y
• 通讯作者: Hirano Y

Controlling the flexibility in memory updating through the gating mechanism for activity-dependent transcription in Drosophila

通过果蝇活性依赖性转录的门控机制控制记忆更新的灵活性

• 发表时间: 2020
• 作者: Xu Zhihong;MacIntosh Andrew J.J.;Castellano-Navarro Alba;Macan?s-Mart?nez Emilio;Suzumura Takafumi;Duboscq Julie;三國貴康;Yukinori Hirano
• 通讯作者: Yukinori Hirano