Basic development for reprogramming methods and translation of regenerative medicine in intervertebral disc cells

椎间盘细胞重编程方法和再生医学转化的基础研究

• 批准号: 20H03809
• 负责人: 酒井 大輔
• 金额: $ 11.23万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03809/
• 关键词: 腰痛; 椎間板; 再生医療; 細胞移植; リプログラミング; 椎間板再生; 幹細胞; 髄核細胞; 再生医学; 培養法; 凍結保存

我々は椎間板髄核細胞の培養においてラミニンコートディッシュを用いる事でTie2発現を維持し,結果2型コラーゲンの発現が高く,コロニー形成能に優れた機能性の高い細胞を得る事が可能であることを示した. そこで,このTie2陽性髄核前駆細胞の2型コラーゲン産生向上に関わる要因として新たに各種インテグリンレセプターの機能解析を行なった.腰椎椎間板ヘルニア手術を受けた患者から同意取得し採取したヒト髄核組織(n=5,平均年齢:19.1±3.0歳)より細胞を単離し,６日間培養を実施した(20%FBS, 37℃, O2 5%, CO2 21%, 3×104個/6ml). 同条件で２種類のディッシュ(ノンコート[N群],ラミニンコート[L群])を使用し2群を比較検討した. Flow cytometryを用いて培養後の細胞表面マーカー(CD49a, CD49c, CD49f, Tie2, GD2, CD24), 細胞内マトリックス(2型コラーゲン[Col2],プロテオグリカン[PG])を評価した. また, Western Blottingを用いて細胞内に発現するCol2をタンパク質レベルで評価した.細胞表面マーカーはTie2発現率(N群7.1±3.5%, L群18.5±7.4%, p<0.05)がL群で有意に高かった. CD49a発現率(N群33.2%, Ｌ群52.8%), CD49c発現率(N群55.2%, Ｌ群72.8%)はＬ群で高い傾向にあった. ,CD49f発現率は両群共に高発現を示した(N群89.2%, Ｌ群94.5%).Col2でもL群(N群13.2±7.8%, L群25.7±8.9%, p<0.05)で有意に高く, Western Blottingによるタンパク質レベルでのCol2発現においても, 同様にL群で高い発現レベルを示した.

The development of Tie-2 in culture of intervertebral plate nuclei was maintained. As a result, the development of type-2 nuclei was high, and the formation of Tie-2 cells was excellent. The main reason for the up-regulation of the production of type 2 cells in Tie2 positive pre-nuclear cells is the functional analysis of various cell types. Lumbar intervertebral disc surgery was performed on patients who consented to obtain nuclear tissue (n=5, mean age:19.1±3.0 years). Cells were isolated and cultured for 6 days (20% FBS, 37℃, O2 5%, CO2 21%, 3×104 cells/6ml). Under the same conditions, two kinds of ([N group],[L group]) are used to compare the two groups. Flow cytometry was used to evaluate cell surface morphology (CD49a, CD49c, CD49f, Tie2, GD2, CD24) and intracellular morphology (type 2 Col2, PG) after culture. In addition, Western Blotting is used to evaluate the intracellular production of Col2. The rate of Tie2 on cell surface was 7.1± 3.5% in group N, 18.5± 7.4% in group L, p<0.05. CD49a (33.2% in group N, 52.8% in group L), CD49c (55.2% in group N, 72.8% in group L), and CD49c (55.2% in group L) were detected in group L. CD49f was found to be significantly higher in group N (89.2%) and group L (94.5%). Col2 was found to be significantly higher in group L (13.2± 7.8% in group N, 25.7± 8.9% in group L, p<0.05).

项目成果

椎間板再生医療の研究

椎间盘再生医学研究

椎間板再生医療は腰痛治療となり得るか?

椎间盘再生医学可以治疗腰痛吗？

• 发表时间: 2022
• 作者: 志馬伸朗;酒井大輔
• 通讯作者: 酒井大輔

椎間板変性に対する再生医療の産業化への挑戦

椎间盘退变再生医学产业化的挑战

• 发表时间: 2022
• 作者: Tsukahara;T. Watanabe;K. Murata;K. Takahashi;A. Mizushima;E. Shibayama;Y. Kameshima;H. Hatae;R. Ohno;Y. Kawahara;R. Murai;A. Nakatsugawa;M. Kubo;T. Kanaseki;T. Hirohashi;Y. Terui;T. Asanuma;H. Hasegawa;T. Sato;N. Torigoe;T.;酒井大輔
• 通讯作者: 酒井大輔

椎間板再生医療とリハビリテーションによる腰痛治療の変革への期待

期望通过椎间盘再生医学和康复彻底改变腰痛治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: 酒井大輔

髄核細胞マスターレギュレーター転写因子を含む分化誘導剤、誘導髄核細胞の製造方法、および誘導髄核細胞の用途

含有髓核细胞主调节转录因子的分化诱导剂、诱导髓核细胞的制造方法以及诱导髓核细胞的用途

• 发表时间: 2019