Basic development for reprogramming methods and translation of regenerative medicine in intervertebral disc cells

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我々は椎間板髄核細胞の培養においてラミニンコートディッシュを用いる事でTie2発現を維持し,結果2型コラーゲンの発現が高く,コロニー形成能に優れた機能性の高い細胞を得る事が可能であることを示した. そこで,このTie2陽性髄核前駆細胞の2型コラーゲン産生向上に関わる要因として新たに各種インテグリンレセプターの機能解析を行なった.腰椎椎間板ヘルニア手術を受けた患者から同意取得し採取したヒト髄核組織(n=5,平均年齢:19.1±3.0歳)より細胞を単離し,６日間培養を実施した(20%FBS, 37℃, O2 5%, CO2 21%, 3×104個/6ml). 同条件で２種類のディッシュ(ノンコート[N群],ラミニンコート[L群])を使用し2群を比較検討した. Flow cytometryを用いて培養後の細胞表面マーカー(CD49a, CD49c, CD49f, Tie2, GD2, CD24), 細胞内マトリックス(2型コラーゲン[Col2],プロテオグリカン[PG])を評価した. また, Western Blottingを用いて細胞内に発現するCol2をタンパク質レベルで評価した.細胞表面マーカーはTie2発現率(N群7.1±3.5%, L群18.5±7.4%, p<0.05)がL群で有意に高かった. CD49a発現率(N群33.2%, Ｌ群52.8%), CD49c発現率(N群55.2%, Ｌ群72.8%)はＬ群で高い傾向にあった. ,CD49f発現率は両群共に高発現を示した(N群89.2%, Ｌ群94.5%).Col2でもL群(N群13.2±7.8%, L群25.7±8.9%, p<0.05)で有意に高く, Western Blottingによるタンパク質レベルでのCol2発現においても, 同様にL群で高い発現レベルを示した.