Sensitive evaluation method for neurotoxicity using a novel marker

使用新型标记物的神经毒性敏感评估方法

• 批准号: 20H04342
• 负责人: 古武 弥一郎
• 金额: $ 11.07万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H04342/
• 关键词: 神経毒性評価; 核呼吸因子-1; 毒性評価系

昨年度までに確立したNRF-1レポーター遺伝子を導入した細胞を用いて，本年度も引き続き各種化学物質のNRF-1活性と細胞毒性評価を行った．特に今年度は神経突起伸長とNRF-1活性，細胞生存の関係を明らかにするため，Neuro2A細胞にNREレポーター遺伝子を導入し，分化誘導剤を添加した状態で実験に用いた．NRF-1活性をレポーターのEGFP緑色で（96ウェルプレートの6ウェルの平均をコントロール群の平均で割って活性を算出），Thermo社 のNeurite Outgrowth Staining Kitを使用し，生細胞をカルセインの青色で，神経突起を赤色で染色し，High Content Screening装置Opera Phenix（Perkin Elmer）を用いて神経突起長などを計測することによるアッセイの自動化を試みた．実験条件を確立するためのモデル化合物としてトリブチルスズ (TBT) を30 nMから3 microMの濃度で用いた．しかしながらNeuro2Aの分化誘導条件の検討などに手間取り，神経突起の自動認識も困難を極めたため，NRF-1, 生細胞，神経突起３者の自動定量化には至らなかった．今後実験系を精査し，アッセイ系を確立する予定である．

Yesterday, we established the NRF-1 gene transfer into cells. This year, we introduced NRF-1 activity and cytotoxicity evaluation of various chemicals. In particular, the relationship between neurite elongation and NRF-1 activity in Neuro2A cells and cell survival has been clarified.NRF-1 activity has been demonstrated in EGFP cells.(96 ° C, 6 ° C, 6 ° C, High Content Screening Device Opera Phenix (Perkin Elmer) To establish the conditions, the concentration of the compound was determined from 30 nM to 3 microM. Neuro2A differentiation induction conditions were investigated manually, and the automatic recognition of neurites was difficult. NRF-1, cytogenesis, and the automatic quantification of neurites 3 were investigated manually. In the future, the system will be carefully examined and established.

项目成果

発達神経毒性物質に共通する発現変動遺伝子の探索

寻找发育神经毒性物质常见表达变化的基因

• 发表时间: 2023
• 作者: 藤原 涼雅;宮良 政嗣;竹原 有希;高林 智樹;山本 佑樹;田原 栄俊;古武 弥一郎
• 通讯作者: 古武 弥一郎

Triphenyltin inhibits GA-binding protein α nuclear translocation

三苯基锡抑制 GA 结合蛋白 α 核转位

• DOI: 10.2131/fts.7.33
• 发表时间: 2020
• 期刊: Fundamental Toxicological Sciences
• 作者: Kidoguchi Naohiro;Ishida Keishi;Sanoh Seigo;Miyara Masatsugu;Kotake Yaichiro
• 通讯作者: Kotake Yaichiro

Prenatal exposure to valproic acid causes allodynia associated with spinal microglial activation

• DOI: 10.1016/j.neuint.2022.105415
• 发表时间: 2022-08-26
• 期刊: NEUROCHEMISTRY INTERNATIONAL
• 影响因子: 4.2
• 作者: Imado, Eiji;Sun, Samnang;Ago, Yukio
• 通讯作者: Ago, Yukio

Tributyltin activates the Keap1–Nrf2 pathway via a macroautophagy-independent reduction in Keap1

三丁基锡通过 Keap1 的巨自噬独立还原来激活 Keap1-Nrf2 通路

• DOI: 10.2131/jts.48.161
• 发表时间: 2023
• 期刊: The Journal of Toxicological Sciences
• 作者: Hatano Misaki;Hatamiya Shunichi;Miyara Masatsugu;Kotake Yaichiro
• 通讯作者: Kotake Yaichiro

Amiodarone bioconcentration and suppression of metamorphosis in Xenopus

胺碘酮在非洲爪蟾中的生物富集和变态抑制

• DOI: 10.1016/j.aquatox.2020.105623
• 发表时间: 2020
• 期刊: Aquatic Toxicology
• 影响因子: 4.5
• 作者: Sanoh Seigo;Hanada Hideki;Kashiwagi Keiko;Mori Tsukasa;Goto-Inoue Naoko;Suzuki Ken-ichi T.;Mori Junpei;Nakamura Naoki;Yamamoto Takashi;Kitamura Shigeyuki;Kotake Yaichiro;Sugihara Kazumi;Ohta Shigeru;Kashiwagi Akihiko
• 通讯作者: Kashiwagi Akihiko