原発性免疫不全症の遺伝的素因解明に関する研究

阐明原发性免疫缺陷疾病遗传易感性的研究

• 批准号: 20J10721
• 负责人: 谷田 けい
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J10721/
• 关键词: 免疫不全症; 転写調節; 転写制御異常

CRISPR/dCas9システムの構築について：pEF1a-BirA-V5-neoおよびpEF1a-FB-dCas9-puroのプラスミドを購入した（Addgene社）。K562に導入したところ、後者は抗FB抗体によって検出されず安定株が得られなかった。そこで、Inducible Caspex expressionプラスミドを新たに購入した。別途THP-1株に患者由来の変異をCRISPR/Cas9を用い変異株を作成し、野生株と変異株THP-1に導入し安定発現株を作成中である。作成後はguide RNAを用い変異付近にdCas9を誘導し、免疫沈降後に蛋白を抽出しproteome解析を行う。Luciferase assayについて：pGL4.10-luciferase2 vectorに、BTK遺伝子のpromoter領域配列や、同配列に加えintron1の3’配列側1029bpおよびExon2の5’側配列の一部を含むものを挿入したものを作成し、B細胞系株とT細胞系株を用い、Luciferase assayを行った。するとSplice異常が示されているExon1のsplice donor siteの変異では転写活性が上がったが、intron1内の変異では活性が明らかに低下し、intron 1内の変異が転写に影響する可能性が示唆された。ZIP7異常症の解析について：B細胞欠損と無ガンマグロブリン血症を呈した女児で認められたSLC39A7遺伝子の複合ヘテロ接合性変異に関して、一方はZIP7のプロテアソーム分解を促進し、もう一方は小胞体上のZIP7の局在に異常をもたらす変異であることを証明した。この遺伝子がコードする蛋白であるZIP7は細胞内小器官から細胞質への亜鉛輸送を担うっており、B細胞分化やそのほかの免疫細胞の成熟・生存に亜鉛動態が重要となる可能性を示唆することができた。

The CRISPR/dCas9 system architecture is described as pEF1a-BirA-V5-neo and pEF1a-FB-dCas9-puro (Addgene). K562 was introduced into the plant, and the latter was infected with anti-FB antibodies. Inductive Caspex Expression Different THP-1 strains are different from CRISPR/Cas9, and different strains are introduced into the wild. After preparation, guide RNA was used to extract protein from dCas9. Luciferase assayについて： pGL4.10-luciferase2 vector, BTK promoter domain alignment, coalignment, intron1 3 'alignment, 1029bp, Exon2 5' alignment, B-cell strain, T-cell strain, Luciferase assay Splice anomaly indicates the possibility that variation in the splice donor site of Exon1 may affect the activity of the splice donor site. Variation in intron 1 may affect the activity of the splice donor site. Analysis of ZIP7 abnormalities: B cell deficiency, absence of ZIP7 abnormalities, identification of SLC39A7 complex zygosity, promotion of ZIP7 abnormality, and identification of ZIP7 abnormalities This protein is important for intracellular lead transport in small organs, cytoplasm, and immune cell maturation and survival, indicating the possibility that lead dynamics are important for B cell differentiation and development.

项目成果

Early diagnosis of partial interferon-γ receptor 1 deficiency prevents the development of Bacille de Calmette et Guerin osteomyelitis

早期诊断部分干扰素-γ受体1缺陷可预防卡介苗和格林杆菌骨髓炎的发生

• DOI: 10.1016/j.clim.2022.108933
• 发表时间: 2022
• 期刊: Clinical Immunology
• 影响因子: 8.6
• 作者: Tomomasa Dan;Tanita Kay;Higashi Seishi;Tasaka Yuri;Shimamura Takashi;Sakurai Urara;Matsubara Tomoyo;Okada Satoshi;Morio Tomohiro;Kanegane Hirokazu
• 通讯作者: Kanegane Hirokazu

Clinical and Immunological Heterogeneity in Japanese Patients with Gain-of-Function Variants in STAT3

• DOI: 10.1007/s10875-021-00975-y
• 发表时间: 2021-01-26
• 期刊: JOURNAL OF CLINICAL IMMUNOLOGY
• 影响因子: 9.1
• 作者: Tanita, Kay;Sakura, Fumiaki;Kanegane, Hirokazu
• 通讯作者: Kanegane, Hirokazu

本邦で発見したB細胞欠損女児における新奇SLC39A7遺伝子変異とZIP7機能異常

日本发现 B 细胞缺陷女孩中新的 SLC39A7 基因突变和 ZIP7 功能异常

• 发表时间: 2021
• 作者: 嶋屋 拓朗;竹内 一将;鈴木裕香;谷田けい
• 通讯作者: 谷田けい

Patient with the Gain-of-function mutations in STAT3 present with a variety o autoimmune disease.

STAT3 功能获得性突变的患者患有多种自身免疫性疾病。

• 发表时间: 2020
• 作者: T. Shimaya;R. Okura;Y. Wakamoto and K. A. Takeuchi;Kay Tanita
• 通讯作者: Kay Tanita

Case Report: Rotavirus Vaccination and Severe Combined Immunodeficiency in Japan.

• DOI: 10.3389/fimmu.2022.786375
• 发表时间: 2022
• 期刊: Frontiers in immunology
• 影响因子: 7.3
• 作者: Tanita K;Kawamura Y;Miura H;Mitsuiki N;Tomoda T;Inoue K;Iguchi A;Yamada M;Yoshida T;Muramatsu H;Tada N;Matsui T;Kato M;Eguchi K;Ishimura M;Ohga S;Imai K;Morio T;Yoshikawa T;Kanegane H
• 通讯作者: Kanegane H