权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

巨大蛋白質会合体ヘモシアニンを利用した汎用的な電子顕微鏡単粒子解析技術の開発

使用巨型蛋白聚集体血蓝蛋白开发通用电子显微镜单颗粒分析技术

基本信息

批准号：
20J10837
负责人：
橋本翼
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、大きく方針を変え、ヘモシアニンとは異なるＲＮＡ―タンパク質巨大分子複合体をスキャフォールドとして用いることを試みた。巨大分子中の複数箇所でゲスト分子との接続点となるＲＮＡ配列の挿入箇所を検討し、最適なスキャフォールド分子を設計した。また、設計したスキャフォールドには、複数のRNA結合タンパク質が結合することを生化学実験により明らかにした。これらの中から、３０ｋＤａ以下のクライオ電子顕微鏡単粒子解析で構造解析を行うには非常に小さいタンパク質をターゲットゲスト分子とし、実際に設計したスキャフォールド分子に結合させて単粒子解析を行った。収集したデータセットに対し、画像処理を試みたところ、通常の処理では結合点の柔軟性が課題となり、結合したゲスト分子を可視化することは叶わなかった。そこで、特定箇所に着目した画像処理を検討し、最終的に５－６オングストローム程度の分解能で、ゲスト分子の全体像を可視化したクライオ電顕マップを取得することに成功した。これは、決して高分解能での構造決定とは言えないものの、巨大なホスト分子と小さなゲスト分子とを接続するアプローチにより、クライオ電子顕微鏡単粒子解析による構造解析を可能にする可能性を十分に示す結果であると言える。今後は、今回得られた結果を基に、接続部位の改良・最適化を行うことで、より高分解能での構造解析を可能とするスキャフォールド分子の開発が期待される。

This year's big policy is to change the size of the RNA complex. A large number of sites in the molecular structure of the RNA alignment into a single site design, optimal site design A combination of RNA and DNA is designed to be a biochemical process. For example, the electron microscope particle analysis, structural analysis, and design of the electron microscope particles below 30kDa are very important. The problem of flexibility of the binding point is that the binding point is not visible. For example, the image processing of a specific site is discussed, and the final resolution of the 5-6 degree of separation can be achieved. The entire image of the molecule is visualized. The structural analysis of high resolution energy is possible, and the results are shown in detail. In the future, we will get the results of improving and optimizing the base and joint parts. We hope that the development of molecular structure can be achieved by high resolution energy analysis.