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難治性固形癌への効率的抗体デリバリーを可能とする二段階送達システムの開発

开发两步递送系统，能够将抗体有效递送至难治性实体瘤

基本信息

批准号：
20J11536
负责人：
山内聡一郎
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

以下に本年度の研究において得られた知見をまとめる。（1）インテイン反応を利用した大腸菌体内環状scFv調製法を用いてTrastuzumab由来の環状scFv（Tras-scFv）を調製した。本手法で調製した環状scFvは連結部分に新たなシステイン残基が導入される。このシステイン残基を利用してscFvの欠点である抗原結合価数の減少による抗原結合力の低下を補うために、チオール反応性の官能基を持つ架橋剤を用いて環状Tras-scFv二量体を調製した。表面プラズモン共鳴（SPR）測定の結果、環状Tras-scFv単量体と比較して、環状Tras-scFv二量体はavidity効果により抗原結合力が向上していることを確認した。（2）環状scFvの保存安定性および血中滞留性の向上を目指し、環状Tras-scFv中のシステイン残基に対して様々な分子量の直鎖型および分岐型PEG鎖を部位特異的に修飾したPEG化環状scFvを調製した。Trastuzumab-HER2複合体立体構造から、PEG修飾部位はscFvの抗原認識部位とは反対側に位置することを確認したため、PEG修飾は環状scFvの抗原結合活性に影響を与えないと予想した。実際にSPR測定による解析を行った結果、PEG修飾による抗原結合活性の大幅な低下は確認されなかった。続いて、保存安定性に関して検討した結果、PEG修飾により耐熱性および凍結乾燥後の溶解性が有意に向上することが明らかとなった。また、健常マウスを用いた体内動態解析を行った結果、PEG修飾による分子量増大に伴い、環状Tras-scFvの消失半減期が最大で15倍延長した。

The following "this year" study will help you to know what you want to know. (1) the environmental scFv assay was used to determine the origin of Trastuzumab. The environmental scFv (Tras-scFv) was isolated from the bacteria. In this technique, the environmental scFv link is used to introduce the residue into the environment. The binding capacity of antigens was reduced by the number of antigens combined with scFv antigens. The binding power of antigens was lower than that of antigens, and the functional bases of antigens and reactionaries were used to carry the DNA scaffold. Environmental Tras-scFv biosensor was used. The results of surface chromatography assay (SPR), ambient Tras-scFv mass assay, and ambient Tras-scFv binary avidity assay antigen binding force were used to confirm the accuracy. (2) the preservation of stability in the environmental scFv, the retention in the blood of the target, the environmental Tras-scFv, the molecular weight, the distribution, the stability, the stability, the retention, the molecular weight, the molecular weight The antigens of Trastuzumab-HER2 replicates, the antigens of scFv antigens, the antigens of scFv antigens and the antigens of peripheral scFv antigens were identified. The results of SPR analysis and the antigen binding activity of PEG repair assay were significantly lower than those of the control group. After drying, the solubility test is intended to improve the solubility after drying, the results of the stability test, the stability test, the stability test, The results of dynamic analysis in vivo, the companion of high molecular weight of PEG, and the maximum of 15 times of environmental Tras-scFv disappearance half-cycle were analyzed in vivo.