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難治性固形癌への効率的抗体デリバリーを可能とする二段階送達システムの開発

开发两步递送系统，能够将抗体有效递送至难治性实体瘤

基本信息

批准号：
20J11536
负责人：
山内聡一郎
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

以下に本年度の研究において得られた知見をまとめる。（1）インテイン反応を利用した大腸菌体内環状scFv調製法を用いてTrastuzumab由来の環状scFv（Tras-scFv）を調製した。本手法で調製した環状scFvは連結部分に新たなシステイン残基が導入される。このシステイン残基を利用してscFvの欠点である抗原結合価数の減少による抗原結合力の低下を補うために、チオール反応性の官能基を持つ架橋剤を用いて環状Tras-scFv二量体を調製した。表面プラズモン共鳴（SPR）測定の結果、環状Tras-scFv単量体と比較して、環状Tras-scFv二量体はavidity効果により抗原結合力が向上していることを確認した。（2）環状scFvの保存安定性および血中滞留性の向上を目指し、環状Tras-scFv中のシステイン残基に対して様々な分子量の直鎖型および分岐型PEG鎖を部位特異的に修飾したPEG化環状scFvを調製した。Trastuzumab-HER2複合体立体構造から、PEG修飾部位はscFvの抗原認識部位とは反対側に位置することを確認したため、PEG修飾は環状scFvの抗原結合活性に影響を与えないと予想した。実際にSPR測定による解析を行った結果、PEG修飾による抗原結合活性の大幅な低下は確認されなかった。続いて、保存安定性に関して検討した結果、PEG修飾により耐熱性および凍結乾燥後の溶解性が有意に向上することが明らかとなった。また、健常マウスを用いた体内動態解析を行った結果、PEG修飾による分子量増大に伴い、環状Tras-scFvの消失半減期が最大で15倍延長した。

The following are the results of this year's research. (1) Trastuzumab is a method for modulating cyclic scFv in Escherichia coli bacteria using a cyclic scFv (Tras-scFv) derived from Trastuzumab. This technique involves the introduction of new residues into the cyclic scFv linking part. The use of このシステイン residues and the lack of scFv can reduce the number of antigen-binding factors and compensate for the low antigen-binding ability. The うために、チオールreactive functional group をholds the bridging agent and is modulated with the いて cyclic Tras-scFv binary body. The results of surface pollutant resonance (SPR) measurement, comparison of cyclic Tras-scFv monomers, and confirmation of the avidity effect and antigen-binding capacity of cyclic Tras-scFv twosomes were confirmed. (2) Preservation stability of cyclic scFv, retention in blood, and target residues in cyclic Tras-scFvに対して様々なMolecular weight のstraight-locked type およびBranched PEG locking をsite-specific にmodificationしたPEGylated cyclic scFvをmodulation した. The three-dimensional structure of the Trastuzumab-HER2 complex, the PEG modification part and the scFv antigen recognition part, and the anti-antigen reaction The side position of the scFv has been confirmed, and the influence of the PEG-modified cyclic scFv on the antigen-binding activity has been confirmed. The result of the SPR measurement and analysis of the SPR test and the large decrease in the antigen-binding activity of the PEG-modified test were confirmed.続いて, storage stability and storage stability, heat resistance, PEG modification, solubility after freeze-drying, and solubility after freeze-drying. The results of the in vivo dynamic analysis of Kensei and the results of the PEG-modified molecular weight increase, and the elimination half-life of the cyclic Tras-scFv was extended to a maximum of 15 times.