Thioacid-Based Strategy for the Glycoprotein Synthesis

基于硫代酸的糖蛋白合成策略

基本信息

批准号：
20J20649
负责人：
野村幸汰
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度はこれまでに開発した糖タンパク質合成法である糖鎖挿入法を用いて、32残基目のAsnに複合型型二分岐シアリル糖鎖を有するセリンプロテアーゼ阻害剤カザルタイプ13(SPINK13)の化学合成及びバイオアッセイを共同研究を含めて行った。SPINK13は各種細胞において抗癌活性が示唆されている化合物であり、現在までにSPINK13上の糖鎖の影響が研究された事例は無いことから、本研究では糖鎖の有無による抗癌活性の評価を検討した。ヒト癌細胞株であるhuman hapatoma cell (Huh7), human pancreatic cancer cell (PSN-1) 及び非癌細胞株であるhuman embryonic kidney cell (HEK293)に対して、糖鎖が結合したSPINK13及び糖鎖が結合していないSPINK13を作用させることで、各細胞の増殖能力及び細胞外マトリックス中での浸潤能力を測定した。本研究は大阪大学医学研究科の三善先生との共同研究として行った。その結果、糖鎖の有無に関わらず、いずれの細胞においてもSPINKの有無で細胞の増殖活性は変化しなかった。一方、癌細胞の細胞マトリックス中での浸潤能力は糖鎖の有無によって変化することが解明された。糖鎖がある場合に比べ、糖鎖がない場合のSPINK13を用いた実験では、より癌細胞の浸潤能が低下したことから、癌細胞の浸潤阻害に対し糖鎖はネガティブな影響を与えることが判明した。Alpha Foldによるタンパク質構造シミュレーションを行った結果、癌細胞が周囲の細胞マトリックスを分解する際に発現するプロテアーゼに対して、SPINK13が結合する場合に、結合サイトに糖鎖が付加されている可能性が示唆されたことから、生体内においてSPINK13上の糖鎖はいずれかの段階で除去される可能性がることが見出された。

今年，我们使用Glycoprotein Synathess Gogate是一种合作研究，使用了糖蛋白插入方法，该方法在第32个残基上进行了ASN的丝氨酸蛋白酶抑制剂的化学合成和生物测定，该丝氨酸蛋白酶抑制剂具有复杂型的siAllyl Glycan，使用糖基化插入方法，一种糖蛋白插入方法，一种糖蛋白插入方法，一项相当多的合作研究，包括合作研究。 Spink13是一种化合物，已被认为在各种细胞中具有抗癌活性，并且由于迄今已研究了聚糖对Spink13的影响，因此这项研究检查了基于存在或不存在Glycans的抗癌活性的评估。每个细胞在细胞外基质中的增殖和侵袭能力通过作用于人类Hapatoma细胞（HUH7），人胰腺癌细胞（PSN-1）和非癌细胞系人类胚胎肾细胞（HEK293），通过与糖基化和Spink13与glycosylation一起使用SPINK13。这项研究是与大阪大学医学研究生院Miyoshi教授合作进行的。结果，无论是否有聚糖，都没有或没有尖刺的细胞中的细胞增殖活性。另一方面，已经表明，细胞基质中癌细胞的侵入性能力取决于聚糖的存在或不存在。在使用Spink13的实验中，当没有糖链时，癌细胞的浸润能力降低了，发现聚糖对癌细胞的浸润抑制有负面影响。使用Alpha折叠对蛋白质结构进行仿真表明，当Spink13与癌细胞降解周围细胞基质降解时所表达的蛋白酶时，可以将聚糖添加到结合位点，因此发现在任何阶段都可以在Vivo中除去Spink13上的Glycan。