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ユビキチン修飾による鉄代謝制御系の最上流因子の探索

通过泛素修饰寻找铁代谢控制系统最上游因子

基本信息

批准号：
20J20906
负责人：
市原知哉
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-24 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J20906/
关键词：
鉄代謝ユビキチン FBXL5

项目摘要

本研究は、FBXL5を分解制御する因子を同定することを目的とする。予備的実験においてFBXL5の分解を蛍光でモニターできるレポーター細胞を作製した。CRISPR/Cas9システムを用いたゲノムワイドスクリーニングをおこなうために、レンチウイルスを用いてsgRNA (single guide RNA)ライブラリーを蛍光レポーター細胞に導入した。ライブラリー導入細胞の中で鉄欠乏条件下において蛍光が安定化している細胞集団をセルソーターで回収し、次世代シークエンサー解析により回収後の細胞に濃縮されたsgRNA配列を探索した。しかしながら、回収できた蛍光安定化細胞はごく少数であったため、今回の解析では統計学的に有意に回収後の細胞に濃縮されたsgRNA配列を同定することが出来なかった。並行して、生化学的手法によるスクリーニングをおこなった。FBXL5の野生型鉄結合ドメインまたはデグロンを欠損した変異型鉄結合ドメインを過剰発現した細胞を用いてIP-MSをおこない、野生型鉄結合ドメインに特異的に結合するユビキチンリガーゼを複数同定した。しかし、これらの候補因子を個別にノックダウンしてもFBXL5の安定化を確認することが出来なかった。この結果は、FBXL5の分解制御に複数のユビキチンリガーゼが関与している可能性を示唆しており、さらに文献情報を踏まえると、ある一群のユビキチンリガーゼが協調的にFBXL5を分解制御しているという仮説が考えられる。

This paper presents a study of FBXL5 decomposition and control factors. In preparation for the implementation of FBXL5 decomposition, the light is emitted from the cell. CRISPR/Cas9 system is used in the introduction of sgRNA (single guide RNA) into cells. In the absence of iron, the cells introduced into the cells were stabilized by light, and the sgRNA alignment was explored in the cell population after the recovery and analysis of the next generation. A few of the cells were stabilized by light, and the analysis of the results showed that the concentration of sgRNA in the cells after light stabilization was statistically determined. Parallel, biochemical methods to prevent and treat cancer FBXL5 wild-type iron-binding proteins are found in cells with IP-MS, wild-type iron-binding proteins are found in cells with IP-MS, and wild-type iron-binding proteins are found in cells with IP-MS. The candidate factors for FBXL5 are identified individually. The results show that FBXL5's decomposition control system has the possibility of multiple transactions and coordination, and a group of transactions and coordination of FBXL5's decomposition control system has been investigated.

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification and characterization of novel proteins associated with CHD4

与 CHD4 相关的新型蛋白质的鉴定和表征

DOI：
10.1111/gtc.12909
发表时间：
2021
期刊：
Genes to Cells
影响因子：
2.1
作者：
Sakaguchi Chihiro;Ichihara Kazuya;Nita Akihiro;Katayama Yuta;Nakayama Keiichi I.
通讯作者：
Nakayama Keiichi I.

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