Establishment of a novel serum diagnosis method for flaviviruses based on binding profiles of anti-flavivirus antibodies

基于抗黄病毒抗体结合谱建立黄病毒新型血清诊断方法

• 批准号: 20J22269
• 负责人: 田畑 耕史郎
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-24 至 2023-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20J22269/
• 关键词: 蚊媒介性フラビウイルス感染症; 昆虫特的フラビウイルス; 交差反応性抗体; フラビウイルス感染症; 抗体; 交叉反応; 血清診断; 抗フラビウイルス抗体; 交叉反応性

蚊媒介性フラビウイルス（MBFV）である、Dengue virus（DENV)、Zika virus（ZIKV）、Japanese encephalitis virus（JEV）、やWest Nile virus（WNV）の構造タンパク質はアミノ酸配列の相同性が高く、特にFusion loop（FL）ドメインはMBFV種間で最も保存されている領域である。それ故に、FLドメインを認識する抗体は、異なるMBFVに対して交差反応性を示すことが知られている。本研究では、lineage I insect specific flavivirus（ISFV-I）がMBFVと異なる抗原性のFLドメインを有していることを見出した。そこで、ISFV-Iが有する特徴的なアミノ酸残基をJEVのFLドメインに置換したSubviral particle（SVP）を作出し、SVPに対する抗FLモノクローナル抗体の結合性を評価した。その結果、野生型のJEV-SVPと比べ、変異型JEV-SVPでは抗FLモノクローナル抗体の結合が抑制された。JEV-SVPと同様に、DENV、ZIKV、及びWNVの野生型並びに変異型SVPを作出し、そのSVP抗原を用いたELISA法にて、MBFV感染血清中のウイルス種特異的抗体の検出を試みた。感染血清は、ZIKVまたはWNVを感染させたマウス標準血清（SVPと同一ウイルス株を感染させた血清）、及び試験血清（SVPと異なるウイルス株を感染させた血清）を用いた。その結果、標準血清並びに試験血清において、野生型SVPと比較して、変異型SVPは、血清中の交差反応性抗体の結合性を低下させ、ウイルス種特異的抗体の検出感度を上昇させた。以上の結果から、変異型SVPを抗原としたELISA法は、交差反応性を低減させた特異性の高い血清診断法開発に繋がることが期待される。

蚊子传播黄病毒（MBFVS），登革热病毒（DENV），寨卡病毒（ZIKV），日本脑炎病毒（JEV）和西尼罗河病毒（WNV）的结构蛋白质具有高氨基酸序列，尤其是融合循环（FL），尤其是MBF，其中最大的是MBF，其中最大的是MBF，因此，已知识别FL结构域的抗体表现出与不同MBFV的交叉反应性。在这项研究中，我们发现谱系I抑制特定的黄病毒（ISFV-I）具有与MBFV不同的抗原FL结构域。因此，产生了一个亚病毒颗粒（SVP），其中ISFV-I的特征性氨基酸残基被JEV的FL结构域取代，并评估了抗FL单克隆抗体与SVP的结合特性。结果，与野生型JEV-SVP相比，在突变体JEV-SVP中抑制了抗FL单克隆抗体的结合。与JEV-SVP相似，产生了DENV，ZIKV和WNV的野生型和突变体SVP，并使用SVP抗原尝试了ELISA的MBFV感染血清中病毒物种特异性抗体的检测。感染的血清是一种被ZIKV或WNV感染的标准小鼠血清（血清感染了与SVP相同的病毒菌株）和测试血清（被病毒菌株与SVP不同的血清感染）。结果，与野生型SVP相比，在标准和测试血清中，突变体SVP降低了血清中交叉反应性抗体的结合，并降低了病毒物种特异性抗体的检测敏感性。基于上述结果，预计使用突变体SVP作为抗原的ELISA方法将导致发展高度特定的血清诊断方法，从而降低交叉反应性。

项目成果

各種フラビウイルスに対する蚊特異的フラビウイルス抗体の反応性解析

蚊子特异性黄病毒抗体针对各种黄病毒的反应性分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 田畑耕史郎;板倉友香里;岸本麻衣;佐々木道仁;澤洋文;大場靖子
• 通讯作者: 大場靖子

Serological characterization of lineage II insect-specific flaviviruses compared with pathogenic mosquito-borne flaviviruses

II 系昆虫特异性黄病毒与致病性蚊媒黄病毒相比的血清学特征

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2022.05.080
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Tabata Koshiro;Itakura Yukari;Toba Shinsuke;Uemura Kentaro;Kishimoto Mai;Sasaki Michihito;Harrison Jessica J.;Sato Akihiko;Hall William W.;Hall Roy A.;Sawa Hirofumi;Orba Yasuko
• 通讯作者: Orba Yasuko

蚊特異的フラビウイルスの蚊成体における感染動態の解析

蚊子特异性黄病毒在成年蚊体内的感染动态分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 田畑耕史郎;江下優樹;佐々木道仁;澤洋文;大場靖子
• 通讯作者: 大場靖子

ポリIg受容体による可変領域非依存的な分泌型IgA抗体の多量体形成促進機構

多聚 Ig 受体促进可变区独立的分泌型 IgA 抗体多聚体形成机制

• 发表时间: 2021
• 作者: 田畑耕史郎;鈴木忠樹;佐野芳;齊藤慎二;相内章;佐々木道仁;長谷川秀樹;大場靖子;澤洋文
• 通讯作者: 澤洋文

Stereotyped B-cell response that counteracts antigenic variation of influenza viruses

• DOI: 10.1093/intimm/dxaa038
• 发表时间: 2020-09-01
• 期刊: INTERNATIONAL IMMUNOLOGY
• 影响因子: 4.4
• 作者: Tonouchi, Keisuke;Adachi, Yu;Takahashi, Yoshimasa
• 通讯作者: Takahashi, Yoshimasa