卵管采・卵巣におけるクローンの時間的空間的ダイナミクスの解明

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正常人の卵巣、卵管の研究検体試料の収集を行ったが、研究の解析に十分な症例数の集積が見込まれず、研究の進捗を伸ばすことが困難であった。そのため、同様にクローン拡大の解析がなされていない臓器である胆管を研究対象として研究試料収集と解析を行った。原発性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis; PSC)は、肝内外の胆管の線維性狭窄を生じる進行性慢性炎症疾患である。しばしば胆管がんを合併するが、その病因は未だ不明で病態の理解は進んでいない。近年ゲノム解析から、一見正常な組織にも加齢や炎症に伴って遺伝子異常が蓄積し、遺伝子異常を有するクローンが拡大しており、発癌リスクとなっていることが明らかになっている。炎症による破壊と再生で拡大する変異クローンを解析することは発癌や炎症疾患の病態解明につながる可能性がある。今年度、研究員は原発性硬化性胆管炎の肝内胆管に生じる拡大変異クローンの解析を行った。肝移植例3症例について肝内胆管をPAXgene固定し、レーザーマイクロダイセクションにて上皮組織を切り出した。100μm－1mm長の上皮領域を合計64か所切り出し、得た微量のDNAについて全エクソーム解析を行った。その結果、平均17/サンプル/エクソームの変異が検出され、胆管壁の線維性肥厚を伴った被炎症胆管の上皮にはKRAS,PTEN,ATMなどの既知の癌ドライバー遺伝子の変異を持つクローンが存在していることがわかった。また、ホルマリン固定パラフィンブロックの微小な胆管上皮の変異解析について条件検討を行った。連続切片を作製してサンプル採取することで、ホルマリン固定パラフィンブロックでは最小1mm長の上皮領域についてシーケンスライブラリの作製が可能であった。