NASH憎悪因子である悪玉ミュータンス菌の検出キットの開発

开发不良变形链球菌（NASH 加重因素）检测试剂盒

• 批准号: 20K02352
• 负责人: 長嶺 憲太郎
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hiroshima International University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K02352/
• 关键词: LAMP法; NASH; ミュータンス菌; ジンジバリス菌; 口腔内細菌; う蝕; 歯周病; 遺伝子検査; ストロンチウムアパタイト

本研究では、唾液中に含まれているミュータンス菌の中でもcnm/pa陽性ミュータンス菌を短時間に且つ簡便に検出する方法を確立し、cnm/pa陽性ミュータンス菌の保有頻度と対象者背景との関連性を明らかにすることを目的としている。今回、等温で遺伝子を増幅できるLAMP法を用いた検出法の確立に関する研究を行った。現在までに、cnm遺伝子を検出するLAMP用プライマーの設計を終了しており、精製したDNAレベルで特異的に検出できることを確認している。今回、更に詳細な検討を行った結果、本技術がcnm遺伝子を十分検出できるレベルであることを確認し、その結果を報告した（Kitagawa et.al. Analytical Biochemistry Volume 605, 113812, 2020）。すなわち、口腔内細菌のうちジンジバリス菌、ソブリヌス菌、カンジダ菌のDNAを鋳型としてLAMP反応を行っても、これらの細菌は検出できなかった。これは、他の細菌と区別して特異的に検出できていることをあらわしている。また、pa遺伝子を検出するLAMP用プライマーの設計も終了しており、精製したDNAレベルで特異的に検出できることを確認している。条件検討の結果、ポリエチレングリコール濃度を8％にすることで短時間に検出することができた。さらに、今回作製したプライマーが、ミュータンス菌以外の口腔常在菌 (ソブリヌス菌、ジンジバリス菌、カンジダ菌) に反応せず、cnm遺伝子とpa遺伝子のみに特異的に反応することも確認できた。

に in this study で は, saliva contains ま れ て い る ミ ュ ー タ ン ス bacteria in の で も CNM/pa positive ミ ュ ー タ ン ス bacteria を に short time and simple つ に 検 out す を る method to establish positive し, CNM/pa ミ ュ ー タ ン ス bacteria の keep frequency と like the seaborne background と の masato even sex を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. Today back, isothermal で but 伝 を rights of で き る を LAMP method with い た の 検 out method to establish に masato す る を line っ た. Now ま で に, CNM but 伝 を 検 out す る LAMP with プ ラ イ マ ー の design を end し て お り, refined し た DNA レ ベ ル で specific に 検 out で き る こ と を confirm し て い る. Today back, more に detailed な 検 line for を っ た results, this technical が CNM heritage 伝 を son very 検 で き る レ ベ ル で あ る こ と を confirm し, そ の results を reports し た (Kitagawa et. Al. Analytical Biochemistry Volume 605, 113812, (2020). す な わ ち, oral bacteria の う ち ジ ン ジ バ リ ス bacteria, ソ ブ リ ヌ ス bacteria, カ ン ジ ダ bacteria の DNA を type where と し て LAMP against 応 を line っ て も, こ れ ら の bacteria は 検 out で き な か っ た. こ れ は, he の bacteria と difference し て specific に 検 out で き て い る こ と を あ ら わ し て い る. ま た, pa but 伝 を 検 out す る LAMP with プ ラ イ マ ー の design も end し て お り, refined し た DNA レ ベ ル で specific に 検 out で き る こ と を confirm し て い る. Beg の 検 results, ポ リ エ チ レ ン グ リ コ ー を ル concentration 8% に す る こ と で に short time 検 out す る こ と が で き た. さ ら に, this time し た プ ラ イ マ ー が, ミ ュ ー タ ン ス bacteria の mouth often in bacteria (ソ ブ リ ヌ ス bacteria, ジ ン ジ バ リ ス bacteria, カ ン ジ ダ bacteria) に anti 応 せ ず, CNM heritage 伝 child と pa but 伝 の み に specific に anti 応 す る こ と も confirm で き た.

项目成果

cnm+ミュータンス菌の保菌と幼少期の食習慣との関連

CNM+变形链球菌携带与儿童饮食习惯的关系

• 发表时间: 2022
• 作者: 小木曽加奈;斉藤敦;山崎慎也;長嶺憲太郎，木村留美
• 通讯作者: 長嶺憲太郎，木村留美

LAMP法によるPorphyromonas gingivalisのfimA遺伝子II型とIV型の選択的検出

LAMP法选择性检测牙龈卟啉单胞菌fimA基因II型和IV型

• 发表时间: 2020
• 作者: 長嶺憲太郎;應原一久;岡村友理香;北川雅恵
• 通讯作者: 北川雅恵

２種以上の菌の培養方法及び検出方法

两种以上细菌的培养方法及检测方法

• 发表时间: 2022

幼少期の食環境が虫歯の原因菌に及ぼす影響

儿童食物环境对蛀牙细菌的影响

• 发表时间: 2021
• 作者: 木村留美;長嶺憲太郎，北川雅恵;長嶺憲太郎，北川雅恵;木村留美，北川雅恵，長嶺憲太郎
• 通讯作者: 木村留美，北川雅恵，長嶺憲太郎

唾液を用いたcnm陽性ミュータンス菌の迅速診断

利用唾液快速诊断 CNM 阳性变形链球菌

• 发表时间: 2021
• 作者: 長嶺 憲太郎;應原 一久;北川 雅恵
• 通讯作者: 北川 雅恵