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NASH憎悪因子である悪玉ミュータンス菌の検出キットの開発

开发不良变形链球菌（NASH 加重因素）检测试剂盒

基本信息

批准号：
20K02352
负责人：
長嶺憲太郎
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Hiroshima International University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、唾液中に含まれているミュータンス菌の中でもcnm/pa陽性ミュータンス菌を短時間に且つ簡便に検出する方法を確立し、cnm/pa陽性ミュータンス菌の保有頻度と対象者背景との関連性を明らかにすることを目的としている。今回、等温で遺伝子を増幅できるLAMP法を用いた検出法の確立に関する研究を行った。現在までに、cnm遺伝子を検出するLAMP用プライマーの設計を終了しており、精製したDNAレベルで特異的に検出できることを確認している。今回、更に詳細な検討を行った結果、本技術がcnm遺伝子を十分検出できるレベルであることを確認し、その結果を報告した（Kitagawa et.al. Analytical Biochemistry Volume 605, 113812, 2020）。すなわち、口腔内細菌のうちジンジバリス菌、ソブリヌス菌、カンジダ菌のDNAを鋳型としてLAMP反応を行っても、これらの細菌は検出できなかった。これは、他の細菌と区別して特異的に検出できていることをあらわしている。また、pa遺伝子を検出するLAMP用プライマーの設計も終了しており、精製したDNAレベルで特異的に検出できることを確認している。条件検討の結果、ポリエチレングリコール濃度を8％にすることで短時間に検出することができた。さらに、今回作製したプライマーが、ミュータンス菌以外の口腔常在菌 (ソブリヌス菌、ジンジバリス菌、カンジダ菌) に反応せず、cnm遺伝子とpa遺伝子のみに特異的に反応することも確認できた。

In this study, cnm/pa bacteria were detected in saliva and saliva for a short period of time, and the method of confirming and cnm/pa was used to confirm the temperature, and the background was used to show the connection between the two groups. This time, the isothermal method is used to make sure that the LAMP method is used to study the data. Now, the cnm subsystem has verified that the LAMP has used the device design to verify the registration of the device and the exporter of the DNA communication system. This time, please review the results of the operation, the cnm system of this technology, and the results of the Kitagawa et.al. Analytical Biochemistry Volume 605, 113812, 2020). The bacteria in the mouth, the bacteria Please tell the difference between the other bacteria and the other bacteria. In this case, the pa device is used to verify that the LAMP uses the device to verify that the device is correct, and that the device is sensitive to the DNA message. The results of the conditional test results, and the minimum temperature of 8% is required to make a short-term response. In addition to the common oral bacteria (bacteria, bacteria, and bacteria), the anti-bacteria in the oral cavity are commonly present in the oral cavity (bacteria, bacteria,