牛乳プロテオーム解析用プロテオタイピックペプチドライブラリ作成と各種分析への応用

创建用于牛奶蛋白质组分析的蛋白质肽库并应用于各种分析。

• 批准号: 20K02400
• 负责人: 一法師 克成
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K02400/
• 关键词: ターゲット・プロテオミクス; プロテオティピックペプチド; 牛乳; ヤギ乳; タンパク質; ラクトトランスフェリン; LC/MS/MS

昨年度開発した、高速液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析計（LC/MS/MS）による、17種の牛乳タンパク質および13種のヤギ乳タンパク質の一斉分析法を用いて、牛乳およびヤギ乳の定量データを得るため、以下の実験を行った。牛乳とヤギ乳のサンプルから、トリクロロ酢酸/アセトン抽出法を用いて、タンパク質を抽出し、グアニジン塩酸塩等で変性させた後、トリプシン消化を行ったサンプルをLC/MS/MSで分析した。牛乳タンパク質（17種）およびヤギ乳タンパク質（13種）に対応した、プロテオティピックペプチド（17種）に対して、1ペプチド当たり3トランジションのSRM（Selected Reaction Monitoring）トランジションをLC/MS/MSに設定した。また、カラムに、ACQUITY UPLC CSH130 C18 column (150mm×1mm)を使用し、水-アセトニトリル-ギ酸の溶媒系を用いたグラジエント溶出を行った。牛乳およびヤギ乳タンパク質の比較定量データを解析したところ、牛乳とヤギ乳のalpha-S1-casein量に大きな違いがあった。その他、牛乳の機能性タンパク質であるラクトトランスフェリンの分析法を開発するため、ラクトトランスフェリンのプロテオティピックペプチドおよびプロテオティピックペプチドのN末端側およびC末端側に数残基延長したペプチドを、安定同位体で標識したペプチドを合成し、標品のラクトトランスフェリンを用いて、ラクトトランスフェリン分析法の回収率を調べた。

Yesterday's annual open 発 し た, high-speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー / タ ン デ ム quality analyzer (LC/MS/MS) に よ る, 17 の milk タ ン パ ク qualitative お よ び 13 の ヤ ギ milk タ ン パ ク qualitative の a を 斉 analysis using い て, milk お よ び ヤ ギ milk の quantitative デ ー タ を must る た め, the following の be 験 を line っ た. Breast milk と ヤ ギ の サ ン プ ル か ら, ト リ ク ロ ロ boggy acid / ア セ ト ン extraction method を with い て, タ ン パ ク を drew し, グ ア ニ ジ ン salt acid salt で - sex さ せ た, ト リ プ シ ン line digestion を っ た サ ン プ ル を LC/MS/MS analysis で し た. Milk タ ン パ ク mass (17) お よ び ヤ ギ milk タ ン パ ク mass (13) に 応 seaborne し た, プ ロ テ オ テ ィ ピ ッ ク ペ プ チ ド (17) に し seaborne て, 1 ペ プ チ ド when た り 3 ト ラ ン ジ シ ョ ン の SRM (Selected Reaction Monitoring) トラ ジショ ジショ を をLC/MS/MSに Settings た た. ま た, カ ラ ム に, ACQUITY UPLC CSH130 C18 column (150 mm x 1 mm) を use し, water - ア セ ト ニ ト リ ル - の ギ acid solvent system を with い た グ ラ ジ エ ン ト dissolution を line っ た. Breast milk お よ び ヤ ギ タ ン パ ク qualitative の is quantitative デ ー タ を parsing し た と こ ろ, milk と ヤ ギ milk の に large amount of alpha - S1 - casein き な violations い が あ っ た. そ の he, milk の functional タ ン パ ク qualitative で あ る ラ ク ト ト ラ ン ス フ ェ リ ン の analysis を open 発 す る た め, ラ ク ト ト ラ ン ス フ ェ リ ン の プ ロ テ オ テ ィ ピ ッ ク ペ プ チ ド お よ び プ ロ テ オ テ ィ ピ ッ ク ペ プ チ ド の N terminal side お よ び C terminal side に number of residues to extend し た ペ プ チ ド を, stable isotopic で logo し た ペ プ チ ド を synthetic し, standard product の ラ ク ト ト ラ ン ス フ ェ リ ン を with い て, ラ ク ト ト ラ ン ス フ ェ リ ン analysis の 収 rate back を adjustable べ た.

项目成果

LC/MS/MSを用いた牛乳およびヤギ乳タンパク質の比較定量

使用 LC/MS/MS 对牛奶和羊奶蛋白质进行比较定量

• 发表时间: 2022
• 作者: Uchikawa Tomoki;Matoba Tetsuya;Kawahara Takuro;Baba Isashi;Katsuki Shunsuke;Koga Jun-ichiro;Hashimoto Yu;Yamasaki Ryo;Ichi Ikuyo;Akita Hidetaka;Tsutsui Hiroyuki;大橋 寿美子,鈴木歩実;一法師克成
• 通讯作者: 一法師克成