牛乳プロテオーム解析用プロテオタイピックペプチドライブラリ作成と各種分析への応用

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昨年度開発した、高速液体クロマトグラフィー/タンデム質量分析計（LC/MS/MS）による、17種の牛乳タンパク質および13種のヤギ乳タンパク質の一斉分析法を用いて、牛乳およびヤギ乳の定量データを得るため、以下の実験を行った。牛乳とヤギ乳のサンプルから、トリクロロ酢酸/アセトン抽出法を用いて、タンパク質を抽出し、グアニジン塩酸塩等で変性させた後、トリプシン消化を行ったサンプルをLC/MS/MSで分析した。牛乳タンパク質（17種）およびヤギ乳タンパク質（13種）に対応した、プロテオティピックペプチド（17種）に対して、1ペプチド当たり3トランジションのSRM（Selected Reaction Monitoring）トランジションをLC/MS/MSに設定した。また、カラムに、ACQUITY UPLC CSH130 C18 column (150mm×1mm)を使用し、水-アセトニトリル-ギ酸の溶媒系を用いたグラジエント溶出を行った。牛乳およびヤギ乳タンパク質の比較定量データを解析したところ、牛乳とヤギ乳のalpha-S1-casein量に大きな違いがあった。その他、牛乳の機能性タンパク質であるラクトトランスフェリンの分析法を開発するため、ラクトトランスフェリンのプロテオティピックペプチドおよびプロテオティピックペプチドのN末端側およびC末端側に数残基延長したペプチドを、安定同位体で標識したペプチドを合成し、標品のラクトトランスフェリンを用いて、ラクトトランスフェリン分析法の回収率を調べた。