真核生物のリボソーム合成制御の新規機構：ラパマイシン結合タンパク質の真の役割

・出芽酵母のRPGリボソームタンパク質遺伝子(以下RPG:ribosomal protein gene)の転写因子であるRap1、Fhl1、Hmo1、Ifh1、Sfp1、Fpr1、Crf1について、機能的・物理的相互作用を明らかにするべく遺伝学的解析を行った。その結果、FHL1遺伝子の破壊やCrf1過剰発現、何らかの因子のプリオン化、等の状況で、IFH1破壊株の致死性が回避されるなど、不明な点が多いそれらの因子の機能に関する手がかりが得られた。・生育が極めて悪いfpr1Δfhl1Δ二重破壊株に、Met1を除く全ての残基をアラニン（元がアラニンの場合グリシン）に置換したFpr1変異体シリーズを導入し、この株の生育を回復させる事が出来ない変異体のうち、タンパク質自身は安定なものを12個同定した。・上記RPG転写因子の全長を、N末端にGSTタグ、C末端にHisタグを融合して大腸菌で発現させるためのプラスミドを構築し、発現を行った。その結果、Ifh1を除く全てのタンパク質を、その量には差はあるものの、全長として発現することに成功した。・病原性酵母カンジダ・グラブラータの上記RPG転写因子のオルソログについて、ChIP-seq解析により全ゲノム上の標的遺伝子を網羅的に同定した。その結果、これらの因子は本酵母においても様々な組み合わせでRPG遺伝子プロモーターに結合していることを明らかにした（Sfp1は結合が見られず）。さらに本酵母で独自にRPGの転写に関与する因子を新たに同定し、それについても標的遺伝子の同定に成功した。・上記両酵母で保存されているFpr1/FKBP12の転写因子としての機能がヒトでも保存されているのかを検証するべく、HEK293細胞のFKBP12遺伝子に対してゲノム編集を行うことでそのノックアウト細胞、及びC末端領域に免沈用のタグを組み込んだ細胞を樹立した。

・出芽酵母のRPGリボソームタンパク質遺伝子(以下RPG:ribosomal protein gene)の転写因子であるRap1、Fhl1、Hmo1、Ifh1、Sfp1、Fpr1、Crf1について、機能的・物理的相互作用を明らかにするべく遺伝学的解析を行った。その結果、FHL1遺伝子の破壊やCrf1過剰発現、何らかの因子のプリオン化、等の状況で、IFH1破壊株の致死性が回避されるなど、不明な点が多いそれらの因子の機能に関する手がかりが得られた。・生育が極めて悪いfpr1Δfhl1Δ二重破壊株に、Met1を除く全ての残基をアラニン（元がアラニンの場合グリシン）に置換したFpr1変異体シリーズを導入し、この株の生育を回復させる事が出来ない変異体のうち、タンパク質自身は安定なものを12個同定した。・上記RPG転写因子の全長を、N末端にGSTタグ、C末端にHisタグを融合して大腸菌で発現させるためのプラスミドを構築し、発現を行った。その結果、Ifh1を除く全てのタンパク質を、その量には差はあるものの、全長として発現することに成功した。・病原性酵母カンジダ・グラブラータの上記RPG転写因子のオルソログについて、ChIP-seq解析により全ゲノム上の標的遺伝子を網羅的に同定した。その結果、これらの因子は本酵母においても様々な組み合わせでRPG遺伝子プロモーターに結合していることを明らかにした（Sfp1は結合が見られず）。さらに本酵母で独自にRPGの転写に関与する因子を新たに同定し、それについても標的遺伝子の同定に成功した。・上記両酵母で保存されているFpr1/FKBP12の転写因子としての機能がヒトでも保存されているのかを検証するべく、HEK293細胞のFKBP12遺伝子に対してゲノム編集を行うことでそのノックアウト細胞、及びC末端領域に免沈用のタグを組み込んだ細胞を樹立した。