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真核生物のリボソーム合成制御の新規機構：ラパマイシン結合タンパク質の真の役割

控制真核生物核糖体合成的新机制：雷帕霉素结合蛋白的真正作用

基本信息

批准号：
20K05965
负责人：
笠原浩司
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

・出芽酵母のRPGリボソームタンパク質遺伝子(以下RPG:ribosomal protein gene)の転写因子であるRap1、Fhl1、Hmo1、Ifh1、Sfp1、Fpr1、Crf1について、機能的・物理的相互作用を明らかにするべく遺伝学的解析を行った。その結果、FHL1遺伝子の破壊やCrf1過剰発現、何らかの因子のプリオン化、等の状況で、IFH1破壊株の致死性が回避されるなど、不明な点が多いそれらの因子の機能に関する手がかりが得られた。・生育が極めて悪いfpr1Δfhl1Δ二重破壊株に、Met1を除く全ての残基をアラニン（元がアラニンの場合グリシン）に置換したFpr1変異体シリーズを導入し、この株の生育を回復させる事が出来ない変異体のうち、タンパク質自身は安定なものを12個同定した。・上記RPG転写因子の全長を、N末端にGSTタグ、C末端にHisタグを融合して大腸菌で発現させるためのプラスミドを構築し、発現を行った。その結果、Ifh1を除く全てのタンパク質を、その量には差はあるものの、全長として発現することに成功した。・病原性酵母カンジダ・グラブラータの上記RPG転写因子のオルソログについて、ChIP-seq解析により全ゲノム上の標的遺伝子を網羅的に同定した。その結果、これらの因子は本酵母においても様々な組み合わせでRPG遺伝子プロモーターに結合していることを明らかにした（Sfp1は結合が見られず）。さらに本酵母で独自にRPGの転写に関与する因子を新たに同定し、それについても標的遺伝子の同定に成功した。・上記両酵母で保存されているFpr1/FKBP12の転写因子としての機能がヒトでも保存されているのかを検証するべく、HEK293細胞のFKBP12遺伝子に対してゲノム編集を行うことでそのノックアウト細胞、及びC末端領域に免沈用のタグを組み込んだ細胞を樹立した。

Saccharomyces cerevisiae, RPG, Fhl1, Hmo1, Ifh1, Sfp1, Fpr1, Crf1 interaction, physical interactions of organic energy are analyzed in the following RPG:ribosomal protein gene. The results of the test, the results of the FHL1 test, the detection of the Crf1 antibody, the reduction of the etiology of the virus, the isoform of the disease, the fatal avoidance test of the IFH1 strain, the failure of the multi-agent assay, and the success of the multi-factor test. The fpr1 Δ fhl1 Δ double-broken strain of the reproductive plant, the full-length residue fragment of the whole cell, the total residue of the Fpr1, and the reproductive cycle of the parent plant were transferred to the same group, and the child-bearing cell of the child-bearing plant was found to have 12 copies of the same enzyme. The full length of the RPG writing factor, the N-terminal GST, the C-terminal His and the fusion of bacteria show that there is no significant change in the total length of the writing factor, the N-terminal and the C-terminal. The result of the experiment shows that Ifh1 eliminates the whole amount of money, the amount of money, and the whole amount of money. The pathogenic yeast is sensitive to RPG, and the ChIP-seq parses the identity of the sub-network on the full-scale network. The results of this study are as follows: (1) the results of this study showed that the RPG gene was used in combination with each other (Sfp1 and Sfp1). The results showed that the yeast cells were not affected by the combination of the two factors. This yeast alone RPG writes the same as the new one of the factors, and the child of the mother of the yeast alone determines the success of the new yeast. On the record, you can use the yeast to save the Fpr1/FKBP12 write factor, the HEK293 cell, the FKBP12 cell, the write set, and the C-terminal system.