繊維芽細胞増殖因子FGF5と受容体の相互作用およびアプタマーの阻害機序の解明

阐明成纤维细胞生长因子FGF5与其受体的相互作用及适配体的抑制机制

• 批准号: 20K06529
• 负责人: 坂本 泰一
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Chiba Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K06529/
• 关键词: アプタマー; FGF; 線維芽細胞増殖因子; 構造解析; 物理化学的解析; 論理的設計

本研究では，試験管内分子進化法（SELEX法）を用いて，繊維芽細胞増殖因子FGF5に結合するアプタマーの取得にすでに成功している．このアプタマーは，FGF5に対して特異的に，そして強固に結合する（解離定数Kd = 約0.1 nM）ことが明らかとなっているが，その結合メカニズムは明らかになっていない．そこで本研究では， FGF5とアプタマーの相互作用を原子座標レベルで明らかにし，相互作用メカニズムを明らかにすることを目的としている．相互作用メカニズムを明らかにした後，論理的にアプタマーを改変することを目指している．SELEX法により得られたアプタマーを短鎖化した変異体を作成し，56残基でも結合活性を保持することを明らかにした．また，アプタマーは2つのステム・ループ構造と多岐ループを持つことを明らかにし，多岐ループが結合活性に重要であることを明らかにした．このように短鎖化することによって，立体構造の揺らぎが抑えられ，X線結晶構造解析における結晶化に有効であると考えた．そこで，アプタマーとFGF5を大量に調製して，様々な条件で結晶化を試みたが，結晶は得られなかった．次に，アプタマーをさらに短鎖化したり，DNA配列の導入したキメラ型のアプタマーの作成を試みたが，結合能が低下してしまった．再度，配列を検討し，NMRによるアプタマーの構造の確認を進めている．また， FGF5の受容体であるFGFR1cを調製した．表面プラズモン共鳴（SPR）を用いた競合実験によって，アプタマーとFGFR1cは競合的にFGF5に結合することが明らかとなっている． FGF5がFGFR1cに結合するメカニズムも明らかになっていないので，FGF5とFGFR1cの複合体の結晶化も試みている．

In this study, the method of in-tube molecular evolution (SELEX) was used, and the combination of cell proliferation factor FGF5 and cell growth factor FGF5 was successfully tested. The results showed that the combination of Kd (dissociation number Kd = about 0.1 nM) was effective. The purpose of this study is to show that the purpose of this study is to show that the purpose of the interaction is different from that in this study. in this study, the results of this study are as follows: in this study, the results of this study are as follows: in this study, the results of this study are as follows: in this study, the results of this study are as follows: in this study, the results of this study show that FGF5 interaction is sensitive to atomic absorption, and that the purpose of interaction is not clear. The method of Selex has been used to make it easier to make a body, 56 residues combined with activity to keep it clear that it is clear that it does not work, and that it makes sense that it does not make a lot of sense. The combination of multi-channel and active devices makes it clear that there are significant differences between the two, and that they are short-term, stereoscopic, X-ray, and so on. In order to improve the quality of the device, the DNA is equipped with the device to make it possible to make the device. Once again, the device is equipped with the device, the NMR device, the receiver, the FGFR1c, the receiver, the receiver The combination of the FGFR1c and the FGFR1c of the FGF5 FGFR1c will crystallize the structure of the complex of the FGF5 FGFR1c.

项目成果

Vif-CBFβ-CUL5-ELOB-ELOC複合体に結合するアプタマーのNMR解析

适体与 Vif-CBFβ-CUL5-ELOB-ELOC 复合物结合的 NMR 分析

• 发表时间: 2020
• 作者: Kazuyuki Matsumoto;Akira Fujisawa;Minoru Yoshida;熊谷紀志，鈴木拓也，関川湧斗，神庭圭介，万里，永田佳代子，高折晃史，片平正人，永田崇，坂本泰一
• 通讯作者: 熊谷紀志，鈴木拓也，関川湧斗，神庭圭介，万里，永田佳代子，高折晃史，片平正人，永田崇，坂本泰一

タンパク質結晶の最前線（普及版）

蛋白质晶体最前沿（普及版）

• 发表时间: 2020
• 作者: Shigeru Sugiyama;Tomoya Kitatani;Taichi Naruse;Yumeto Otsuka;Hiroaki Adachi;Toshihiro Fujita;and Yusuke Mori;杉山成;杉山成，他51名
• 通讯作者: 杉山成，他51名

線維芽細胞増殖因子FGF5に対するAptamerの開発

成纤维细胞生长因子FGF5适体的开发

• 发表时间: 2022
• 作者: Jo Michiko;Koizumi Keiichi;Suzuki Mizuho;Kanayama Daisuke;Watanabe Yurie;Gouda Hiroaki;Mori Hisashi;Mizuguchi Mineyuki;Obita Takayuki;Nabeshima Yuko;Toyooka Naoki;Okada Takuya;天野 亮，行方 昌人，堀内 正隆，笹生 みなみ，柳澤 拓也，田中 陽一郎，ガニ ファロハナ イスラット，山本 昌邦，坂本 泰一
• 通讯作者: 天野 亮，行方 昌人，堀内 正隆，笹生 みなみ，柳澤 拓也，田中 陽一郎，ガニ ファロハナ イスラット，山本 昌邦，坂本 泰一

NMR Analysis of Interaction between Artificial Peptides and RNAs Derived from HIV-1 Rev and RRE RNA

人工肽与 HIV-1 Rev 和 RRE RNA 衍生的 RNA 之间相互作用的 NMR 分析

• 发表时间: 2021
• 作者: Taiichi Sakamoto;Takashi Nagata;Risa Koji;Tae Maeda;Yumi Takeda;Naohiro Kobayashi;Peter Guntert;Masato Katahira;Colin A. Smith;Kazuo Harada
• 通讯作者: Kazuo Harada

The N93D mutation of the human T-cell leukemia virus type 1 envelope glycoprotein found in symptomatic patients enhances neuropilin-1 b1 domain binding

• DOI: 10.1016/j.bbapap.2021.140708
• 发表时间: 2021-08-07
• 期刊: BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA-PROTEINS AND PROTEOMICS
• 影响因子: 3.2
• 作者: Kusunoki，Hideki;Tanaka，Toshiyuki;Hamaguchi，Isao
• 通讯作者: Hamaguchi，Isao