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ロドプシン周辺の脂質ラフトを構成する脂質の免疫ナノ粒子を用いた網羅的質量分析

使用免疫纳米颗粒对构成视紫红质周围脂筏的脂质进行全面质谱分析

基本信息

批准号：
20K06585
负责人：
妹尾圭司
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2020
资助国家：
日本
起止时间：
2020-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞膜をはじめとする生体膜において、脂質の相分離によって生じる脂質ラフトが情報伝達のコントロールなど多様な役割を果たしていると考えられている。しかし、生体内での状態を保ちながらその性質を分析する事は困難で、特に生化学的な組成の分析には、脂質ラフトとそれ以外の部分を分離する操作を行うことによる影響が問題となってきた。本研究では、免疫ナノ粒子と質量分析装置を用いることで、生体膜中の脂質ラフトを抽出せずに分子組成を解析するという画期的な方法を開発し，この方法でロドプシンの周辺に存在する脂質ラフトを構成している脂質の解析を行う。これまでに、免疫金ナノ粒子や免疫銀ナノ粒子で、脂質ラフトを構成している脂質の分析ができる事を示唆するデータを得ているが、金ナノ粒子を用いた場合，分析できる脂質の種類が少なかった。一方，銀ナノ粒子を用いた場合は多様な脂質が検出出来るが，ナノ粒子の凝集が多く見られるため，脂質ラフト外の脂質の混入の恐れがあることを明らかにしてきた。そこで当該年度においては、免疫銀ナノ粒子の凝集対策を集中して行った。対策の一つは、銀ナノ粒子と抗体を結合させる時の粒子と抗体の比率などを変える事で、より凝集が少なくなる条件を検討した。もう一つは、作成した免疫銀ナノ粒子を、カラムクロマトグラフィーを用いて大きさで分離することによって凝集のない粒子を選択するという方法について検討した。その結果、カラムクロマトグラフィーを用いることによって、ある程度凝集の少ない粒子を回収することに成功した。但し、回収率が低いなどの問題点もあるため、反応条件の改善や、反応用の銀ナノ粒子の改善なども引き続き行う必要が有ると考えている。

The cell membrane was separated from the raw membrane, and the lipid phase was isolated from the cell membrane. The lipid phase was separated from each other. In vivo, in vivo and in vivo. In this study, the equipment of particle mass analysis was used to analyze the composition of lipid molecules in the body membranes. The method was used to analyze the molecular composition of the whole body membrane, and the method was used in this study. Immunized particles, fat particles, fat particles, immune particles, immunized particles, immune particles, immunized particles, immune particles, On the one hand, the particles are mixed with the compound of the fat, and the particles agglutinate the fat. The fat is mixed with the fat. This year, we will focus on the strategy of particle agglutination and immunization. One-off, one-off, one-off, One day, one, two, two, one, two, two, one, two, one, two, six, four, one, two, four, four, one, two, one, two, six, four, one, two, two, one, two, one, two, two, one, two The results showed that the results showed that the particles were not fully agglutinated and the particles were successfully agglutinated in the first place. However, the return rate is low, the problem point is not correct, the condition is improved, and the particle is used to improve the response rate.