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長鎖クモ糸タンパク質遺伝子の利用による高強度シルクの創出

利用长链蜘蛛丝蛋白基因创造高强度丝

基本信息

批准号：
19H02528
负责人：
小島桂
金额：
$ 11.15万
依托单位：
National Agriculture and Food Research Organization
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は昨年度に引き続き、オニグモ、コガネグモからの糸関連遺伝子のクローニングと、遺伝子組換えカイコの作出、及び、遺伝子組換えカイコの系統化・糸サンプル調製を進めた。遺伝子クローニングについては、茨城県つくば市においてオニグモ（Araneus ventricosus)成体を屋外採取し、糸腺組織を採取してmRNA調整ののち縦糸タンパク質遺伝子に特異的なプライマーを用いて逆転写し、最適化したSMART法にしたがって、テンプレートスイッチから2nd strand cDNA合成したのち、In-Fusion法により発現ベクターへのcDNAのディレクショナルクローニングを行った。cDNAクローニングから、コロニーハイブリダイゼーションによるクモ糸タンパク質遺伝子を含むクローンの選抜を繰り返し、得られたクローンの得られたクローンのうち、長鎖のものから順にナノポアシーケンサによる配列確認を行い、タンパク質遺伝子として問題無い配列の選抜を行った。遺伝子クローニングについては、昨年度以上の大きさの遺伝子の取得には至らなかった。遺伝子組換えカイコの作出では、オニグモについて3種（MaSp1, MaSp2, MaSp3)を持つ遺伝子組換えカイコの作出に成功し、それぞれ系統化を進めた。

This year, last year, we introduced the information system, the information system, the information system and the information system of the subgroups. this year, last year, in the current year. In this paper, we use the method of reverse writing, the most efficient SMART method, the most efficient method, and the most efficient way to synthesize 2nd strand cDNA. The In-Fusion method shows that there is no difference between the cDNA and the line. In the cDNA system, you need to make sure that you do not have to choose a row if you do not want to return. If you do not want to return, you need to make sure that you do not have to select a row. In the past year, I have received a lot of money from the previous year. The sub-organization is responsible for the success and systematization of the three (MaSp1, MaSp2, MaSp3).