長鎖クモ糸タンパク質遺伝子の利用による高強度シルクの創出

利用长链蜘蛛丝蛋白基因创造高强度丝

• 批准号: 19H02528
• 负责人: 小島 桂
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19H02528/
• 关键词: 遺伝子組換えカイコ; クモ縦糸; オニグモ; cDNAクローニング; 力学物性; クモ糸シルク; 遺伝子組み換えカイコ; 縦糸タンパク質; ｃDNAクローニング; クモ糸

本年度は昨年度に引き続き、オニグモ、コガネグモからの糸関連遺伝子のクローニングと、遺伝子組換えカイコの作出、及び、遺伝子組換えカイコの系統化・糸サンプル調製を進めた。遺伝子クローニングについては、茨城県つくば市においてオニグモ（Araneus ventricosus)成体を屋外採取し、糸腺組織を採取してmRNA調整ののち縦糸タンパク質遺伝子に特異的なプライマーを用いて逆転写し、最適化したSMART法にしたがって、テンプレートスイッチから2nd strand cDNA合成したのち、In-Fusion法により発現ベクターへのcDNAのディレクショナルクローニングを行った。cDNAクローニングから、コロニーハイブリダイゼーションによるクモ糸タンパク質遺伝子を含むクローンの選抜を繰り返し、得られたクローンの得られたクローンのうち、長鎖のものから順にナノポアシーケンサによる配列確認を行い、タンパク質遺伝子として問題無い配列の選抜を行った。遺伝子クローニングについては、昨年度以上の大きさの遺伝子の取得には至らなかった。遺伝子組換えカイコの作出では、オニグモについて3種（MaSp1, MaSp2, MaSp3)を持つ遺伝子組換えカイコの作出に成功し、それぞれ系統化を進めた。

今年，在去年之后，我们继续从角蜘蛛和slug蜘蛛中克隆与螺纹相关的基因，产生转基因的蚕，并进行系统发育修饰的蚕，并准备螺纹样品。 Regarding gene cloning, adult Araneus ventricosus (Araneus ventricosus) were collected outdoors in Tsukuba City, Ibaraki Prefecture, and the tissue was collected, adjusted mRNA, then reverse-transcription using primers specific to the warp protein gene, and after 2nd strand cDNA was synthesized from the template switch according to the optimized SMART method, cDNA was directed into the expression vector using融合方法。从cDNA克隆中，通过菌落杂交反复选择含有蜘蛛纱蛋白基因的克隆，并按照从长链中获得的克隆顺序使用纳米孔序列确认序列，并选择序列作为蛋白质基因，没有任何问题。关于基因克隆，我们无法获得比去年大小更大的基因。在产生转基因蚕的过程中，我们成功地生产了经过转基因的蚕（MASP1，MASP2，MASP3），并进行了每个它们的系统化。