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長鎖クモ糸タンパク質遺伝子の利用による高強度シルクの創出

利用长链蜘蛛丝蛋白基因创造高强度丝

基本信息

批准号：
19H02528
负责人：
小島桂
金额：
$ 11.15万
依托单位：
National Agriculture and Food Research Organization
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は昨年度に引き続き、オニグモ、コガネグモからの糸関連遺伝子のクローニングと、遺伝子組換えカイコの作出、及び、遺伝子組換えカイコの系統化・糸サンプル調製を進めた。遺伝子クローニングについては、茨城県つくば市においてオニグモ（Araneus ventricosus)成体を屋外採取し、糸腺組織を採取してmRNA調整ののち縦糸タンパク質遺伝子に特異的なプライマーを用いて逆転写し、最適化したSMART法にしたがって、テンプレートスイッチから2nd strand cDNA合成したのち、In-Fusion法により発現ベクターへのcDNAのディレクショナルクローニングを行った。cDNAクローニングから、コロニーハイブリダイゼーションによるクモ糸タンパク質遺伝子を含むクローンの選抜を繰り返し、得られたクローンの得られたクローンのうち、長鎖のものから順にナノポアシーケンサによる配列確認を行い、タンパク質遺伝子として問題無い配列の選抜を行った。遺伝子クローニングについては、昨年度以上の大きさの遺伝子の取得には至らなかった。遺伝子組換えカイコの作出では、オニグモについて3種（MaSp1, MaSp2, MaSp3)を持つ遺伝子組換えカイコの作出に成功し、それぞれ系統化を進めた。

This year, compared with the previous year, we have introduced the following new technologies: information technology, and information technology. Araneus ventricosus adult outdoor sampling, tissue sampling, mRNA regulation, DNA sequencing, DNA sequencing. In-Fusion method for the detection of cDNA fragments from the genome. The cDNA library is composed of a library, a library and a library. The information is collected from the database, and the information is collected from the database. 3 species (MaSp1, MaSp2, MaSp3) are successfully identified and systematized.