上皮細胞の炎症様応答によるがん変異細胞の排除制御

通过上皮细胞的炎症反应控制癌症突变细胞的消除

• 批准号: 19J10318
• 负责人: 佐藤 奈波
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University (2020)Hokkaido University (2019)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J10318/
• 关键词: 細胞競合; 炎症応答; 膜電位; COX-2

前年度に明らかにした炎症応答が変異細胞の排除を抑制するという結果に基づき、マウスモデルの解析を行なった。具体的には当研究室で樹立した細胞競合モデルマウスに膵炎を誘導し、炎症と変異細胞の排除の関係性をvivoにおいても明らかにした。さらに、これまで同定した正常細胞と変異細胞の相互作用の結果起こる炎症応答の上流を理解するために、細胞自律的・細胞非自律的な変化の解析を行った。様々な候補の中で、MDCK細胞の膜電位に着目し解析を行なった。具体的な内容を以下に示す。(1) 膜電位の変化を可視化できる染色方法の確立：これまで報告がなされている試薬の中で、違ったメカニズムによって膜電位を可視化できる、1. Rho6G, 2. DiBAC(4)3, 3. FluoVoltを用いた。膜を脱分極させるカリウムイオンが高濃度に含まれているバッファーを用い、膜が脱分極した際にこれらの試薬が膜電位を反映し蛍光を失う/発するのかを検証した。結果、全ての試薬において膜電位を反映することがわかった。(2) 膜電位の変化の解析：正常細胞とRasV12変異細胞の膜電位を測定した。正常細胞と比較するとRasV12変異細胞ではより膜が脱分極していることを明らかにした。さらに、混合培養下では正常細胞に囲まれたRasV12変異細胞の膜の脱分極が抑えられている様子も明らかにした。上記の細胞自律的/細胞非自律的な膜電位の変化に加えて、細胞膜上のFluoVolt試薬が非常に激しく動いている様子も観察された。この結果から細胞の辺上で膜電位の変化がoscillationしている可能性が考えられる。今後、共同研究によって波が存在するかどうかの可否、または正常細胞-変異細胞間で何らかのやりとりがあるのかどうかを明らかにする。

根据上一年揭示的结果，炎症反应抑制了突变细胞的排除，我们分析了小鼠模型。具体而言，我们在实验室中建立的细胞竞争模型小鼠中诱导胰腺炎，并且在体内也揭示了炎症与突变细胞之间的关系。此外，为了理解迄今为止正常和突变细胞之间相互作用引起的上游炎症反应，我们分析了细胞自主和非自主变化。在各种候选者中，进行了分析，重点是MDCK细胞的膜电位。具体细节如下所示。 （1）建立一种允许可视化膜电位变化的染色方法：在迄今为止报道的试剂中，我们使用了1。Rho6g，2。Dibac（4）3，3。Fluovolt，可以通过不同的机制可视化膜电位。使用含有高浓度的钾离子去极化膜的缓冲液，我们验证了这些试剂是否反映了膜电位并在膜去极化时损失/发射荧光。结果，发现在所有试剂中都反映了膜电位。 （2）分析膜电位的变化：测量正常细胞和RASV12突变细胞的膜电位。与正常细胞相比，据揭示了该膜在RASV12突变细胞中更加去极化。此外，还揭示了在混合培养物中抑制了由正常细胞包围的RASV12突变细胞的去极化。除了上述细胞自主/非自治膜电势变化外，还观察到细胞膜上的Fluovolt试剂非常剧烈地移动。该结果表明，膜电位的变化是细胞边缘的振荡。现在，协作研究将阐明是否有波浪或突变细胞之间是否存在任何相互作用。

项目成果

上皮細胞層の炎症様応答によるがん変異細胞の排除制御

通过上皮细胞层的炎症反应控制癌症突变细胞的消除

• 发表时间: 2020
• 作者: Sato Nanami;Yako Yuta;Maruyama Takeshi;Ishikawa Susumu;Kuromiya Keisuke;Tokuoka Suzumi M.;Kita Yoshihiro;Fujita Yasuyuki;佐藤奈波
• 通讯作者: 佐藤奈波

The COX-2/PGE2 pathway suppresses apical elimination of RasV12-transformed cells from epithelia

• DOI: 10.1038/s42003-020-0847-y
• 发表时间: 2020-03-18
• 期刊: COMMUNICATIONS BIOLOGY
• 影响因子: 5.9
• 作者: Sato, Nanami;Yako, Yuta;Fujita, Yasuyuki
• 通讯作者: Fujita, Yasuyuki