Rhoキナーゼ活性のライブ観察から読み解く腸管上皮細胞脱落の機構

通过实时观察 Rho 激酶活性破译肠上皮细胞脱落的机制

• 批准号: 19J14253
• 负责人: 今西 彩子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J14253/
• 关键词: ROCK活性; シグナル伝達; FRETバイオセンサー; ライブイメージング

本研究では、血管収縮の異常な持続である血管攣縮を制御する時間・空間的な機構に関して、新規制御機構をライブイメージングにより示した。二光子顕微鏡を用いて、ROCK活性をモニターする遺伝子改変マウスの皮下細動脈において血管攣縮を観察する系を確立した。この系では、血管焼灼箇所から上流下流にも広く血管収縮が引き起こされ、この収縮は長く持続する。その一方、ROCK阻害剤投与マウスでは焼灼直後に生じた収縮は焼灼箇所以外ですぐに解けた。平滑筋細胞のROCK活性は、コントロールでは焼灼後に顕著に上昇したが、ROCK阻害剤投与マウスでは上昇は緩やかであった。これらより、焼灼箇所の上流下流においてROCK活性は血管攣縮に必須であると示された。また、カルシウムをモニターする遺伝子改変マウスを用いた血管攣縮時のカルシウム動態の観察では、カルシウム濃度は焼灼直後に全体で上昇し、焼灼箇所以外の領域ですぐに低下したが、血管収縮は持続した。この結果より、カルシウムにより広く引き起こされた血管収縮は、その後焼灼箇所はカルシウム、上流下流はROCK活性により維持されることが示唆された。さらに、神経節阻害剤投与マウスでは、ROCK阻害剤投与マウスと同様に、焼灼直後に全体で生じた血管収縮が、すぐに焼灼箇所以外で解けた。この時、平滑筋細胞のROCK活性は焼灼前後で変化がみられなかった。また、副交感神経阻害剤投与マウスではコントロールと同様の血管攣縮動態とROCK活性動態が観察された。これらの結果から、血管攣縮時のROCK活性化は交感神経による支配を受けることが示唆された。当初予定していたテーマとは逸れたが、本研究により、焼灼応答性のカルシウムにより血管収縮が引き起こされ、その後焼灼箇所ではカルシウム、上流下流では交感神経を介したROCK活性化により血管収縮が維持されるという血管攣縮の制御機構が解明された。

This study で は, abnormal blood vessels 収 shrinkage の な 続 で あ る vascular contracture を suppression す る time, space な institutions に masato し て, new regulation imperial institutions を ラ イ ブ イ メ ー ジ ン グ に よ り shown し た. Two photon 顕 micromirror を with い て, ROCK activity を モ ニ タ ー す る heritage 伝 child change - マ ウ ス の subcutaneous arteriole に お い て vascular contracture を 観 examine す を る department establish し た. こ の is で は, vascular 焼 burning a か ら upper dirty に も hiroo く vascular 収 shrinkage が lead き up こ さ れ, こ の 収 shrinkage は long く hold 続 す る. Youdaoplaceholder0 けた one party, after the application of ROCK inhibitor and ウスで ウスで 焼 焼 焼 after incineration, に produce じた shrinkage and 焼 焼 incineration result in the external ですぐに dissolving けた. Smooth muscle cells の ROCK active は, コ ン ト ロ ー ル で は 焼 after burning に 顕 through に し た が, ROCK resistance against one vote and マ ウ ス で は rise は slow や か で あ っ た. The activity of the upper and lower reaches of the にお てROCK of the 焼 burn site <s:1> vascular contracture に must であると show された. ま た, カ ル シ ウ ム を モ ニ タ ー す る heritage 伝 child change - マ ウ ス を with い た blood vessels when contracture の カ ル シ ウ ム dynamic の 観 examine で は, カ ル シ ウ ム concentration は 焼 に all で increased after the burning straight し, 焼 burning so の field outside で す ぐ に low し た が, vascular 収 shrinkage は 続 し た. こ の results よ り, カ ル シ ウ ム に よ り hiroo く lead き up こ さ れ た vascular 収 shrinkage は, そ の 焼 burning a after は カ ル シ ウ ム, high low は ROCK activity に よ り maintain さ れ る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, god 経 section resistance to hurt one of cast and マ ウ ス で は, ROCK resistance against one vote and マ ウ ス と with others に, 焼 burning straight after all born で じ に た vascular 収 shrinkage が, す ぐ に 焼 burning a so outside で solution け た. The <s:1> ROCK activity of smooth fascia cells is で and 焼 before and after incineration で changes がみられな った った. ま た, parasympathetic 経 resistance against tonic for god with マ ウ ス で は コ ン ト ロ ー ル と with others の vascular contracture dynamic と ROCK dynamic active が 観 examine さ れ た. The <s:1> れら <s:1> result is that when vascular contracture occurs, the <s:1> ROCK is activated and the <s:1> sympathetic nerve is による dominated and を is instigated by ける とが とが とが された. Had designated し て い た テ ー マ と は escape れ た が, this study に よ り, 焼 burning 応 a sexual の カ ル シ ウ ム に よ り vascular 収 shrinkage が lead き up こ さ れ, そ の 焼 burning a after で は カ ル シ ウ ム, high low で は sympathetic god 経 を interface し た ROCK activeness に よ り vascular 収 shrinkage が maintain さ れ る と い う vascular system of contracture の imperial institutions が interpret さ れ た.

项目成果

病理と臨床

病理学和临床

• 发表时间: 2022
• 作者: 菱川 善隆;Narantsog Choijookhuu;石塚 匠;柴田 恭明;小路 武彦
• 通讯作者: 小路 武彦

Real-time evaluation of ROCK activation by a F&#246;rster resonance energy transfer-based biosensor during vasospasm in living mice

F 实时评估 ROCK 激活

• 发表时间: 2019
• 作者: Imanishi A;Sumiyama K;Matsuda M;Terai K
• 通讯作者: Terai K