权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

一細胞計測と光遺伝子操作を利用した遺伝型-表現型対応の履歴依存性の理解

使用单细胞测量和光遗传学操作了解基因型-表型对应的历史依赖性

基本信息

批准号：
19J22506
负责人：
小金澤優太
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

薬剤耐性遺伝子を失っても薬剤クロラムフェニコール(Cp)に適応する大腸菌の研究について、昨年度は大サブユニットと小サブユニットのリボソームタンパク質の発現バランスが一度崩れ、分裂を続けた細胞ではこのバランスが回復することを明らかにした。リボソームの発現はguanosine penta- or tetra- phosphate ((p)ppGpp)が制御している。そのため、本年度はこの(p)ppGppの発現をモニターする細胞株を用いて耐性遺伝子を失っても薬剤に適応できる細胞の(p)ppGppの変化を観察した。その結果、Cp環境下でCp耐性遺伝子を失った細胞では(p)ppGppが減少したが、Cp環境で分裂を続けられる細胞は分裂を停止した細胞に比べて(p)ppGppが多いことを明らかにした。この結果は(p)ppGppの減少がリボソームタンパク質の発現を必ずしもストイキオメトリーに沿わない形で増加させるという先行研究を踏まえると、分裂を続けられなかった細胞ではより(p)ppGppが減少したためより強くリボソームのバランスが崩れ成長できなくなったと推測される。また、リボソームタンパク質の発現バランスまでの研究成果については追加解析を加えてまとめ、論文誌「eLife」に掲載予定である。さらにより幅広い遺伝子をターゲットにして遺伝子除去をした後の細胞の表現型変化を観察するためにはより効率の良い遺伝子組換え技術が必要不可欠である。そのため、本年度は蛍光タンパク質を利用し細胞の蛍光の有無から遺伝子組換えに成功したかどうかを即時に明らかにする方法を確立した。ゲノム上の6つの部位について遺伝子組み換えを行い、従来の方法では組換えに成功した細胞が数％しかいないような組換えに対しても、蛍光を利用することで80％近い確率で組換えに成功した細胞を取り出すことに成功した。この方法の確立によってより簡便に遺伝子組換えに成功した細胞を選び出すことができるようになった。

In the past year, the development of E. coli, which is suitable for the development of E. coli, has been greatly reduced, and the development of E. coli, which is suitable for the development of E. coli, has been greatly reduced. The development of the complex is controlled by guanosine penta- or tetra-phosphate ((p)ppGpp). This year, the development of (p)ppGpp in cell lines was observed in response to the loss of tolerance genes and the transformation of (p)ppGpp in cells. The result is that CP tolerance gene is lost in cells, and CP tolerance gene is lost in cells, and CP tolerance gene is lost in cells. The results showed that ppGpp decreased rapidly and the quality of the cells increased rapidly. The results of this research are presented in the journal "eLife", which is published in the journal "Additional Analysis". In addition, it is necessary to observe the phenotype of cells after gene removal, and to change the expression rate of cells after gene removal. This year, the quality of the light and the presence of light in the sub-assembly were successfully established. 6 parts of the body, the sub-group, the sub-group, the sub-group This method is easy to establish and successful in cell selection.

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

耐性遺伝子の除去に抗した薬剤耐性表現型の履歴依存的な維持

针对耐药基因去除的耐药表型的历史依赖性维持

DOI：
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
0
作者：
小金澤優太;佐藤守俊;若本祐一
通讯作者：
若本祐一

Adaptation to genetic modification in Escherichia coli

大肠杆菌对基因改造的适应

DOI：
发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
0
作者：
Miki Umetani;Yuta Koganezawa;Moritoshi Sato;Yuichi Wakamoto
通讯作者：
Yuichi Wakamoto

History Dependent Phenotypic Buffering of Bacteria against Drug Resistant Gene Deletion (日本語タイトル:耐性遺伝子の除去に反した表現型バッファの履歴依存性)

History Dependent Phenotypic Buffering of Bacteria against Drug Resistant Gene Deletion（日文名称：History Dependent Phenotypic Buffering of Bacteria against Drug Resistant Gene Deletion）