霊長類始原生殖細胞を卵母細胞に誘導する体外培養系の確立

共同研究機関の滋賀医科大学 動物生命科学研究センターにおいて、胎生８～１８週のカニクイザル胎仔の採取を定期的に実施した。カニクイザル雌性生殖細胞の発生過程における単一細胞レベルでの遺伝子発現動態を、single-cell 3 prime RNA sequence法などを用いた方法で解析し、文献にて報告されているマウス・ヒトにおける同過程との詳細な比較解析を推進した。また、組織学的解析（H&E染色・免疫染色など）により、細胞レベルでの発生機構（減数分裂の進行など）の詳細な解析を実施した。同様の解析を、免疫不全マウスの腎被膜下へ異種移植したカニクイザル再構成卵巣に対しても行い、異種移植法にてカニクイザル雌性生殖細胞の発生が概ね順調に進行することを証明した。カニクイザル再構成卵巣の体外培養法の開発に向け、マウスの同様の培養系で用いられている気相液相境界部培養法による培養を実施したところ、カニクイザル再構成卵巣はその形態を維持することができず、適切な培養条件でないことが明らかとなった。そこで、様々な培養条件を検討した結果、減数分裂を進行させることが可能な体外培養条件を新規に見出した。当条件で培養したカニクイザル再構成卵巣内の細胞について、in vivoの胎仔卵巣細胞と同様の性質を有しているか、組織学的解析・遺伝子発現解析による詳細な比較検討を現在行なっている。今後も引き続き、体外培養系の更なる改善を試み、再構成卵巣に含まれる生殖細胞および体細胞が、正常に分化しているかを評価する。適切な体外培養系が確立できれば、カニクイザルES細胞由来の始原生殖細胞との再構成卵巣を同様に培養し、カニクイザルES細胞からの卵子形成誘導を試みる。

共同研究機関の滋賀医科大学 動物生命科学研究センターにおいて、胎生８～１８週のカニクイザル胎仔の採取を定期的に実施した。カニクイザル雌性生殖細胞の発生過程における単一細胞レベルでの遺伝子発現動態を、single-cell 3 prime RNA sequence法などを用いた方法で解析し、文献にて報告されているマウス・ヒトにおける同過程との詳細な比較解析を推進した。また、組織学的解析（H&E染色・免疫染色など）により、細胞レベルでの発生機構（減数分裂の進行など）の詳細な解析を実施した。同様の解析を、免疫不全マウスの腎被膜下へ異種移植したカニクイザル再構成卵巣に対しても行い、異種移植法にてカニクイザル雌性生殖細胞の発生が概ね順調に進行することを証明した。カニクイザル再構成卵巣の体外培養法の開発に向け、マウスの同様の培養系で用いられている気相液相境界部培養法による培養を実施したところ、カニクイザル再構成卵巣はその形態を維持することができず、適切な培養条件でないことが明らかとなった。そこで、様々な培養条件を検討した結果、減数分裂を進行させることが可能な体外培養条件を新規に見出した。当条件で培養したカニクイザル再構成卵巣内の細胞について、in vivoの胎仔卵巣細胞と同様の性質を有しているか、組織学的解析・遺伝子発現解析による詳細な比較検討を現在行なっている。今後も引き続き、体外培養系の更なる改善を試み、再構成卵巣に含まれる生殖細胞および体細胞が、正常に分化しているかを評価する。適切な体外培養系が確立できれば、カニクイザルES細胞由来の始原生殖細胞との再構成卵巣を同様に培養し、カニクイザルES細胞からの卵子形成誘導を試みる。