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霊長類始原生殖細胞を卵母細胞に誘導する体外培養系の確立

灵长类原始生殖细胞诱导卵母细胞体外培养体系的建立

基本信息

批准号：
19J22891
负责人：
水田賢
金额：
$ 2.18万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J22891/
关键词：
霊長類カニクイザル生殖細胞卵母細胞体外培養

项目摘要

共同研究機関の滋賀医科大学動物生命科学研究センターにおいて、胎生８～１８週のカニクイザル胎仔の採取を定期的に実施した。カニクイザル雌性生殖細胞の発生過程における単一細胞レベルでの遺伝子発現動態を、single-cell 3 prime RNA sequence法などを用いた方法で解析し、文献にて報告されているマウス・ヒトにおける同過程との詳細な比較解析を推進した。また、組織学的解析（H&E染色・免疫染色など）により、細胞レベルでの発生機構（減数分裂の進行など）の詳細な解析を実施した。同様の解析を、免疫不全マウスの腎被膜下へ異種移植したカニクイザル再構成卵巣に対しても行い、異種移植法にてカニクイザル雌性生殖細胞の発生が概ね順調に進行することを証明した。カニクイザル再構成卵巣の体外培養法の開発に向け、マウスの同様の培養系で用いられている気相液相境界部培養法による培養を実施したところ、カニクイザル再構成卵巣はその形態を維持することができず、適切な培養条件でないことが明らかとなった。そこで、様々な培養条件を検討した結果、減数分裂を進行させることが可能な体外培養条件を新規に見出した。当条件で培養したカニクイザル再構成卵巣内の細胞について、in vivoの胎仔卵巣細胞と同様の性質を有しているか、組織学的解析・遺伝子発現解析による詳細な比較検討を現在行なっている。今後も引き続き、体外培養系の更なる改善を試み、再構成卵巣に含まれる生殖細胞および体細胞が、正常に分化しているかを評価する。適切な体外培養系が確立できれば、カニクイザルES細胞由来の始原生殖細胞との再構成卵巣を同様に培養し、カニクイザルES細胞からの卵子形成誘導を試みる。

Joint Research Institute of Animal Life Sciences, Shiga Medical University, 8 - 18 weeks of gestation, and regular fetal collection A detailed comparative analysis of the development process of female germ cells using single-cell 3 prime RNA sequence method was carried out. Histological analysis (H&E staining and immunostaining) and detailed analysis of the development mechanism (meiosis) This article demonstrates that the development of female germ cells is regulated in the same way as in the case of renal subcapsular xenotransplantation. The development direction of in vitro culture method for reconstituting eggs and the culture system of the same type are as follows: The new culture conditions are discussed in detail. The results of meiosis are discussed in detail. When the conditions are cultured, the cells in the reconstructed eggs are cultured, and the characteristics of the fetal eggs in vivo are different. Histological analysis, genetic analysis, detailed comparison and discussion are carried out. In the future, we will try to improve the quality of the culture line, reconstruct the egg, include germ cells and somatic cells, and evaluate the normal differentiation. In vitro culture systems were established to test the induction of egg formation from primordial germ cells and reconstituted eggs derived from embryonic stem cells.