Development of plasma bubble spray administration and clinical application to gastrointestinal cancer

大腸癌の罹患率、死亡率は男女ともに増加している。我々は、前年度での実験の再現性確認のために、大気圧低温プラズマを培養液に照射して投与する方法の実験回数(3回)を増加し検討した。プラズマバブル培養液と直接動物投与する実験の準備として腸洗浄液に照射するプラズマバブル腸洗浄液を作製した。ヒト結腸腺癌細胞COLO205を用いて大気圧低温プラズマ照射培地の暴露による評価を行った。比較対象群として未処理の培地で培養する Control群、Heガスのみ照射する Heガス照射群を設け、プラズマバブル群と比較した(すべての群でn=6)。実験結果では、Control群と He照射群の間で細胞数変化に有意差はなかった。またHe照射による COLO-205への影響はないと考えられた。プラズマバブル群はControl群、He照射群と比べ有意に細胞数が減少し癌細胞の減少が確認できた。大腸癌細胞の減少の誘因として、プラズマ照射に伴う活性酸素種による細胞死の誘導が考えられる。そこで、リアルタイムPCR(Polymerase Chain Reaction)法を用いた細胞死関連遺伝子の検出を行い、大腸癌細胞の減少がアポトーシスに起因するか検討した。活性酸素種の ASK1活性化によるアポトーシスはミトコンドリアを介し て誘起される。そこでCaspase-9はミトコンドリアから放出されるシトクロムCによって活性化され、それに続くアポトーシス実行タンパクを活性化する遺伝子であるため、その発現量を測定することによりアポトーシスの誘起が確認できる。そこで、Caspase-3の遺伝子発現解析を行いプラズマ照射群でその発現量が増加する傾向が認められた。そのため、ミトコンドリアを介したアポトーシスである可能性があり再度実験回数(3回)を増やし検討した結果、同様な成績を得た。

大腸癌の罹患率、死亡率は男女ともに増加している。我々は、前年度での実験の再現性確認のために、大気圧低温プラズマを培養液に照射して投与する方法の実験回数(3回)を増加し検討した。プラズマバブル培養液と直接動物投与する実験の準備として腸洗浄液に照射するプラズマバブル腸洗浄液を作製した。ヒト結腸腺癌細胞COLO205を用いて大気圧低温プラズマ照射培地の暴露による評価を行った。比較対象群として未処理の培地で培養する Control群、Heガスのみ照射する Heガス照射群を設け、プラズマバブル群と比較した(すべての群でn=6)。実験結果では、Control群と He照射群の間で細胞数変化に有意差はなかった。またHe照射による COLO-205への影響はないと考えられた。プラズマバブル群はControl群、He照射群と比べ有意に細胞数が減少し癌細胞の減少が確認できた。大腸癌細胞の減少の誘因として、プラズマ照射に伴う活性酸素種による細胞死の誘導が考えられる。そこで、リアルタイムPCR(Polymerase Chain Reaction)法を用いた細胞死関連遺伝子の検出を行い、大腸癌細胞の減少がアポトーシスに起因するか検討した。活性酸素種の ASK1活性化によるアポトーシスはミトコンドリアを介し て誘起される。そこでCaspase-9はミトコンドリアから放出されるシトクロムCによって活性化され、それに続くアポトーシス実行タンパクを活性化する遺伝子であるため、その発現量を測定することによりアポトーシスの誘起が確認できる。そこで、Caspase-3の遺伝子発現解析を行いプラズマ照射群でその発現量が増加する傾向が認められた。そのため、ミトコンドリアを介したアポトーシスである可能性があり再度実験回数(3回)を増やし検討した結果、同様な成績を得た。