上陸時の器官進化の保守と革新を可視化するGCM２複合体標的遺伝子座の網羅比較解析

APEX2を結合したマウス及びゼブラフィッシュのGCM2（GCM2-APEX2）をマウスHEK293細胞株に導入し、APEX2によってビオチン化される分子の細胞内局在を比較した。マウスGCM2-APEX2では、ビオチン化された分子は核で少なく、細胞質に多く検出された。一方、ゼブラフィッシュGCM2-APEX2では、ビオチン化された分子のほとんどが核に検出された。マウスGCM2タンパク質自体は培養細胞内に検出されにくく、ゼブラフィッシュGCM2タンパク質は核に強く検出されることから、ゼブラフィッシュGCM2タンパク質は安定して核内にとどまるのに対し、マウスGCM2タンパク質は核から細胞質に移動して分解されている可能性が示唆された。２種のGCM2間の転写活性化能をルシフェラーゼアッセイにより定量化した。48時間の結果では2種で大きな違いは認められなかったが、両者の転写活性化ドメイン(TAD)を入れ替えた様々なキメラGCM2を作成し転写活性化能を比較したところ、マウスのTAD2はゼブラフィッシュのTAD2よりも高い転写活性化能を示した。さらにこれらに比較して、ゼブラフィッシュTAD1-マウスTAD2のキメラGCM2は、非常に高い転写活性化能を示すことも明らかとなり。TAD1とTAD2の組み合わせによって転写活性化能が大きく変化することが明らかとなった。2016年Guan等がヒトGCM2のTAD1内の1アミノ酸置換がhyperparathyroidismを引き起こすことをすでに示しているが、今回の実験でも、TAD1とTAD2の両者が転写活性化能の制御に重要な役割を果たすことが示唆された（第45回日本分子生物学会年会、第128回日本解剖学会総会・全国学術集会にて発表）。

APEX2を結合したマウス及びゼブラフィッシュのGCM2（GCM2-APEX2）をマウスHEK293細胞株に導入し、APEX2によってビオチン化される分子の細胞内局在を比較した。マウスGCM2-APEX2では、ビオチン化された分子は核で少なく、細胞質に多く検出された。一方、ゼブラフィッシュGCM2-APEX2では、ビオチン化された分子のほとんどが核に検出された。マウスGCM2タンパク質自体は培養細胞内に検出されにくく、ゼブラフィッシュGCM2タンパク質は核に強く検出されることから、ゼブラフィッシュGCM2タンパク質は安定して核内にとどまるのに対し、マウスGCM2タンパク質は核から細胞質に移動して分解されている可能性が示唆された。２種のGCM2間の転写活性化能をルシフェラーゼアッセイにより定量化した。48時間の結果では2種で大きな違いは認められなかったが、両者の転写活性化ドメイン(TAD)を入れ替えた様々なキメラGCM2を作成し転写活性化能を比較したところ、マウスのTAD2はゼブラフィッシュのTAD2よりも高い転写活性化能を示した。さらにこれらに比較して、ゼブラフィッシュTAD1-マウスTAD2のキメラGCM2は、非常に高い転写活性化能を示すことも明らかとなり。TAD1とTAD2の組み合わせによって転写活性化能が大きく変化することが明らかとなった。2016年Guan等がヒトGCM2のTAD1内の1アミノ酸置換がhyperparathyroidismを引き起こすことをすでに示しているが、今回の実験でも、TAD1とTAD2の両者が転写活性化能の制御に重要な役割を果たすことが示唆された（第45回日本分子生物学会年会、第128回日本解剖学会総会・全国学術集会にて発表）。