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上陸時の器官進化の保守と革新を可視化するGCM２複合体標的遺伝子座の網羅比較解析

GCM2复杂靶位点全面对比分析，可视化着陆过程中器官进化的维持和创新

基本信息

批准号：
19K07258
负责人：
岡部正隆
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K07258/
关键词：
マウスゼブラフィッシュ Gcm2 HEK293 転写 TAD APEX 副甲状腺鰓転写制御ゲノム CRISPR/Cas9 Gcm 発生進化

项目摘要

APEX2を結合したマウス及びゼブラフィッシュのGCM2（GCM2-APEX2）をマウスHEK293細胞株に導入し、APEX2によってビオチン化される分子の細胞内局在を比較した。マウスGCM2-APEX2では、ビオチン化された分子は核で少なく、細胞質に多く検出された。一方、ゼブラフィッシュGCM2-APEX2では、ビオチン化された分子のほとんどが核に検出された。マウスGCM2タンパク質自体は培養細胞内に検出されにくく、ゼブラフィッシュGCM2タンパク質は核に強く検出されることから、ゼブラフィッシュGCM2タンパク質は安定して核内にとどまるのに対し、マウスGCM2タンパク質は核から細胞質に移動して分解されている可能性が示唆された。２種のGCM2間の転写活性化能をルシフェラーゼアッセイにより定量化した。48時間の結果では2種で大きな違いは認められなかったが、両者の転写活性化ドメイン(TAD)を入れ替えた様々なキメラGCM2を作成し転写活性化能を比較したところ、マウスのTAD2はゼブラフィッシュのTAD2よりも高い転写活性化能を示した。さらにこれらに比較して、ゼブラフィッシュTAD1-マウスTAD2のキメラGCM2は、非常に高い転写活性化能を示すことも明らかとなり。TAD1とTAD2の組み合わせによって転写活性化能が大きく変化することが明らかとなった。2016年Guan等がヒトGCM2のTAD1内の1アミノ酸置換がhyperparathyroidismを引き起こすことをすでに示しているが、今回の実験でも、TAD1とTAD2の両者が転写活性化能の制御に重要な役割を果たすことが示唆された（第45回日本分子生物学会年会、第128回日本解剖学会総会・全国学術集会にて発表）。

APEX2 is a combination of HEK293 and GCM2 (GCM2-APEX2). GCM2-APEX2 is a molecular molecule that contains a small amount of DNA and a large amount of DNA. A side, a side, a side. GCM2 is a protein that is stable in the cytoplasm of cells cultured in vitro. It is possible that the cytoplasm of cells cultured in vitro will move. Two kinds of GCM2 were quantified by the method of quantitative analysis. 48. The results show that there are two kinds of TADs: TADs, TA In this case, TAD1-TAD2 is a very high activation energy indicator. TAD1 and TAD2 can be combined to create a large amount of active energy. In 2016, Guan et al. demonstrated the importance of acid substitution in GCM2 and TAD1 for hyperparathyroidism (45th Annual Meeting of the Japanese Molecular Biology Society, 128th Annual Meeting of the Japanese Anatomical Society, National Academic Conference).