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感覚器特異化における転写因子ネットワークの遺伝解析

感觉器官规范中转录因子网络的遗传分析

基本信息

批准号：
12028237
负责人：
岡部正隆
金额：
$ 1.34万
依托单位：
National Institute of Genetics
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

cut遺伝子の機械刺激受容器前駆細胞の発現に十分なcis制御領域は、転写開始点から-30kbに存在する2.8kbのゲノム領域(A3)に存在していることが報告されている。今年度はこのA3領域をより細分化し、cut遺伝子の発現に必要十分な細小ゲノム断片を同定することを目標とした。A3領域を細分化してlacZレポーターと融合させたDNAコンストラクトを構築し、遺伝子組換えショウジョウバエの作成を行い、cut遺伝子の発現に十分なcis調節領域を狭めることを試みた。その結果、cut遺伝子の発現にはA3領域内の127bpのゲノム断片で十分であることが明かとなった。この127bp内には上流因子の一つと考えているbHLH型転写因子の結合配列であるE-boxが2ケ所存在した。一方、127bpゲノム断片内の3'側端の28bpを削ったコンストラクトは、E-boxを削らないにも関わらず、機械刺激受容器前駆細胞における発現に十分ではなかった。そこでこの28bpにbHLH型転写因子とは異なる上流因子が作用する可能性を考えた。28bpを3領域に分割し、それぞれに塩基置換を施したDNAコンストラクトを持った遺伝子組換えショウジョウバエを作成し、この28bp内の必要な塩基配列を明らかにした。その結果、127bpの内、3'端の19bpの塩基配列が必要であることが明かとなった。poxn遺伝子の発現制御領域の解析は過去に報告がないため、poxn遺伝子の転写開始点の周辺を中心にして化学刺激受容器前駆細胞に特異的に発現させるためのcis調節領域の同定を行った。poxn遺伝子の全exonを含む16kbのゲノム領域をクローニングし、それを細分化したレポーターコンストラクトを作成した。遺伝子組換え動物を作成し、cis調節領域の活性をin vivoで検討した。その結果、転写開始点より上流4.2kbのゲノム領域に化学刺激受容器前駆細胞を含むすべてのpoxn発現細胞においてレポーター遺伝子の発現を確認した。転写開始点上流1.7kbおよび1.5kbのレポーターコンストラクトでは十分な活性を得る事ができなかった。

Cut gene mechanically stimulated by the presence of cells in front of the container is controlled by cis in the domain of the start point of writing from-30 kb to 2.8 kb in the domain of the first domain (A3). This year, the A3 domain needs to be segmented and cut into small pieces to achieve the same goal. A3 domain segmentation and fusion of DNA gene structure, gene sub-set transformation, gene production, gene expression, and regulatory domain narrowing As a result, cut fragments were found in the 127bp fragment in the A3 domain. The 127bp upstream factor is present in the E-box and the bHLH type upstream factor is present in the E-box. The 28bp fragment at the 3'end of the 127bp fragment was cut off from the E-box and mechanically stimulated by the vessel's anterior cell. A study of the possibility of a 28bp bHLH type writing factor and an upstream factor acting on it. The 28bp region is divided into three regions, and the necessary nucleotide sequences are clearly identified. As a result, the 127bp inner and 3'end of the 19bp base alignment is necessary. The analysis of the expression control domain of poxn gene in the past, the determination of the expression control domain of cis gene in the center of poxn gene expression control domain The full exon of the poxn gene contains 16kb and the domain is divided into different domains. Cis regulatory domain activity in vivo The results, the start point of writing, and the presence of a 4.2 kb DNA fragment in a chemically stimulated cell containing a DNA fragment in a poxn producing cell were confirmed. 1.7kb up to 1.5kb from the start point of writing.