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ヒトパレコウイルス3型の受容体同定と感染重症化機序の解明

人副肠孤病毒3型受体的鉴定及感染严重程度机制的阐明

基本信息

批准号：
19K08294
负责人：
渡邉香奈子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K08294/
关键词：
ウイルス受容体細胞への侵入ヒトパレコウイルス3型蛍光タンパク質発現組換えヒトパレコウイルス3型 CRISPR/ Cas9 レトロウイルスベクター cDNAライブラリーパレコウイルスA 新生児感染症

项目摘要

ヒトパレコウイルス3型（PeV-A3）は、多くの場合、軽微な胃腸炎や上・下気道炎などをきたす乳幼児感染症の原因ウイルスである。しかしながら、PeV-A3が新生児あるいは早期乳児に感染すると、敗血症様症候群、脳脊髄膜炎などの重症感染症を発症し、4カ月未満児の入院率は7.5人/1,000人である。PeV-A3は腸管上皮もしくは気道上皮細胞などに感染すると考えられているが、感染機構、宿主細胞域の全体像、感染の組織特異性および重症感染症を引き起こす分子機構は不明である。本研究ではPeV-A3のウイルス受容体を同定することによって、宿主細胞域や組織特異性を明らかにする。更に、同定した受容体を発現する動物モデルを樹立し、個体レベルでのPeV-A3感染症の分子機構を解析することにより、新生児において重症化する病態の全容解明を目指している。ヒト由来PeV-A3高感受性細胞（HuTu-80）とヒト遺伝子をターゲットとするCRISPR/Cas9ライブラリーを用いてゲノムワイドランダムノックアウトスクリーニングを実施し、最も多くノックアウトされたMyeloid-associated differentiation marker (MYADM)遺伝子について検討を行った。ハムスター由来のPeV-A3非感受性細胞（BHK-21）にMYADMを強制発現させたBHK-MYADM細胞にPeV-A3を感染させると、細胞変性効果（CPE）の出現と感染性ウイルスの産生が確認された。次に、HuTu-80細胞において、MYADM遺伝子をノックアウトしたMYADM-KO細胞ではCPEの出現と感染性ウイルスの産生は認められなかった。PeV-A3以外のPeV-A1, A2, A4, A5, A6についてもMYADM-KO細胞とBHK-MYADM細胞への感染実験を行い、PeV-A3と同様の結果を得た。

Type 3 (PeV-A3) is a common cause of infantile infections such as gastroenteritis and upper and lower tract inflammation. The incidence of neonatal, peV-A3, early breast infections, hematological syndrome, meningitis, and severe infections was 7.5 per 1,000 in the fourth month. PeV-A3 has been shown to be able to induce infection in intestinal epithelial cells, infection mechanisms, whole images of host cell domains, tissue-specific infection, and severe infections. Molecular mechanisms are unknown. This study demonstrates the identity, host cell domain and tissue specificity of PeV-A3 receptors. In addition, the development of stable receptors in animals, the molecular mechanism of PeV-A3 infection in individuals, and the development of new and severe diseases are indicated. The gene expression of CRISPR/Cas9 was detected by a highly sensitive PeV-A3 cell line (HuTu-80). The most common gene expression was Myeloid-associated differentiation marker (MYADM). PeV-A3 non-susceptible cells (BHK-21) from which MYADM originated were identified by stress detection and infection of BHK-MYADM cells. In addition, HuTu-80 cells and MYADM cells were infected by CPE. PeV-A1, A2, A4, A5, A6 and other PeV-A3 cells were infected with MYADM-KO cells and BHK-MYADM cells.

项目成果

期刊论文数量（15）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

国内の小児入院施設における新生児、早期乳児のパレコウイルスA3感染症の前胞子的疫学調査 -第1報

国内儿科住院机构新生儿及早产儿副肠孤病毒A3感染前孢子流行病学调查第1次报告

DOI：
发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
0
作者：
萩原秀俊;松本　浩;立石昇一朗;植松賢司;座波清誉;浅野貴子;三宅紀子;松本直通;野々山恵章;大嶋勇成;相澤悠太　宇田和宏　伊藤健太　庄司健介　大竹正悟　笠井正志　鈴木優子　渡邉香奈子　齋藤昭彦
通讯作者：
相澤悠太　宇田和宏　伊藤健太　庄司健介　大竹正悟　笠井正志　鈴木優子　渡邉香奈子　齋藤昭彦

Development of Novel PCR Assays for Improved Detection of Enterovirus D68