多発性筋炎/皮膚筋炎の筋組織の免疫表現型解析による病態解明と疾患再分類への挑戦

通过肌肉组织的免疫表型分析阐明多发性肌炎/皮肌炎的病理学以及疾病重新分类的挑战

• 批准号: 19K08903
• 负责人: 溝口 史高
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019 至 2020
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K08903/
• 关键词: 特発性炎症性筋疾患; 多発性筋炎/皮膚筋炎; トランスクリプトミクス; single cell RNA-seq

本研究では、多発性筋炎/皮膚筋炎(PM/DM)患者の筋組織内の免疫細胞をsingle cell RNA-seqで解析し、筋局所での免疫細胞の特徴と多様性を明らかにして、筋傷害に関連する免疫細胞サブセットの機能とその機能制御に関与する遺伝子の働きをヒト(h)iPS細胞由来の筋細胞とCD8+T細胞(CTL)との共培養系で評価し、新規治療標的の同定を目指した。1患者の筋生検組織を酵素処理し、浸潤している免疫細胞を単離して、cDNA増幅の条件検討後、ライブラリを作成してシークエンスを行った。CD45+細胞の遺伝子発現データの主成分解析で、CD14+細胞/CD4+細胞/CD8+細胞ごとのクラスター形成を認め、umap解析で各細胞種内に複数のクラスターに分かれた亜集団形成を認めた。今後は、各細胞腫の亜集団の遺伝子発現パターンを解析し、免疫細胞サブセットであるか明らかにする。既に3患者の筋組織から細胞を採取済みだが、複数患者検体の解析から筋局所の細胞の免疫表現型の多様性を明らかにし、免疫表現型に基づいて患者をサブタイプ分類する。そして、臨床的特徴を説明する病態からサブタイプごとに有効な治療薬を予測し、薬剤選択の最適化や既存薬剤のリポジショニングによる新規治療開発を目指す。ヒト筋炎のin vitroモデルの方は、樹立済みのPM患者由来hiPS細胞3例のHLAハプロタイプを解析し、WT1を提示するHLA-A*24:02が陽性の1例のhiPS細胞株に筋原生転写因子MyoDを導入して高率に筋細胞へと分化するMyoD強発現hiPS細胞バルクを樹立した。また、京都大学河本先生から頂いたWT1特異的再生CTLが、WT1存在下でHLA-A*24:02+抗原提示細胞により当研究室でも増殖・活性化することを確認した。現在、hiPS細胞由来筋細胞に対するWT1特異的再生CTLによる細胞傷害系を確立中である。

In this study, で で, <s:1> immune cells in the tendon tissue of patients with multiple fasciitis/cutaneous fasciitis (PM/DM) をsingle cells RNA - seq で analytical し, jin bureau で の の immune cells, 徴 と multiple others を Ming ら か に し て, muscle injury に masato even す る immune cells サ ブ セ ッ ト の function と そ の function suppression に masato and す る posthumous son 伝 の 働 き を ヒ ト origin の reinforcement (h) iPS cells と CD8 + T cells (CTL) と の co-culture system で review 価 し, new rules treatment standard The を is defined as を. 1 patient の reinforcement 検 し 処 を enzyme and infiltrate し て い る immune cells を 単 from し て, cDNA raised after 検 の conditions for picture, ラ イ ブ ラ リ を made し て シ ー ク エ ン ス を line っ た. の CD45 + cells survived 伝 son 発 now デ ー タ の principal component analytical で, CD14 + cells/CD4 + / CD8 + cells ご と の ク ラ ス タ ー を recognize め, analytical で umap に inside each cell types of the plural の ク ラ ス タ ー に points か れ た 亜 set 団 form を recognize め た. In the future, 伝, the cultural heritage of the 亜 group of various cell tumors 伝 will be revealed in パタ <s:1> を を analysis of <s:1>, immune cell サブセットである サブセットである and ら にする. Both に 3 patients の muscle tissue か ら cells を take 済 み だ が, patients with plural 検 の parsing か ら reinforcement の の cells by the immune phenotype の multiple others を Ming ら か に し, immune phenotype に base づ い て patients を サ ブ タ イ プ classification す る. そ し て, clinical 徴 を illustrate す る pathological か ら サ ブ タ イ プ ご と に have sharper な treatment 薬 を to し, 薬 tonic sentaku の optimization や existing 薬 tonic の リ ポ ジ シ ョ ニ ン グ に よ る open new rules treatment 発 を refers す. Youdaoplaceholder0 fasciitis in Vitro モ デ ル の は, sets up the 済 み の origin hiPS cells in 3 patients with PM の HLA ハ プ ロ タ イ プ を analytical し, WT1 を prompt す る HLA - A * 24:02 が positive の 1 case の hiPS cell lines に reinforcement native planning write factor MyoD を import し て high rate に muscle cells へ と differentiation す る MyoD strong 発 hiPS fine now Cell バ を を establish た. Mr ま た river, Kyoto university か ら top い た WT1 specific CTL が, WT1 で HLA - A * 24:02 + in the presence of antigen tip cells に よ り when laboratory で も raised colonization, activeness す る こ と を confirm し た. Now, the regenerative CTLによる cell damage system specific to するWT1 in hiPS cells is を being established である.