てんかん原生獲得におけるNeurovascular unit機能破綻の機序解明

本研究では、in vitroでてんかん原生獲得におけるNeurovascular unitの破綻の機序解明および抗てんかん薬や他薬剤によるNeurovascular unit保護効果の検証を目的としている。前年度に引き続きin vitro Neurovascular unitモデルの確立を試みた。これまで製作してきた２次元invitro Blood Brain Barrierモデル（Nakagawa S: Neurochemistry International. 2009, Morofuji Y: Cel Mol Neurobiol.2010）を応用し、ニューロンを共培養することでBBB/Neurovascular unitモデルを作成した。(a)初代培養脳毛細血管内皮細胞：２－３週齢ラット（マウス）単離培した。Puromycinを用いることにより内皮細胞の純度をほぼ100％にすることに成功した。(b)初代培養ペリサイト：同様に２－３週齢ラットより単離培養した。ペリサイトは内皮細胞を単離する操作の過程で単離。(c)初代培養アストロサイト：１－２日齢ラットよりshaking methodで単離培養した。(d)初代培養ミクログリア：１－２日齢ラットよりglial cell cultureとして培養したのちに単離培養した。(e)初代培養ニューロン：胎生E18ラットより大脳皮質を採取し、細胞を分離させ単離培養した。単離細胞を(f)Neurovascular unitモデル：多孔質（0.4μm, 3.0μm pore size）の半透膜をもつ立体培養皿（Transwell）を用い共培養モデルを作成を試みているが、初代培養ニューロンの成長が難しく、共培養モデルとして確立できていない。また既製の初代培養神経細胞を用いて同様の手法を用いて共培養モデルの作成を検討している。

本研究では、in vitroでてんかん原生獲得におけるNeurovascular unitの破綻の機序解明および抗てんかん薬や他薬剤によるNeurovascular unit保護効果の検証を目的としている。前年度に引き続きin vitro Neurovascular unitモデルの確立を試みた。これまで製作してきた２次元invitro Blood Brain Barrierモデル（Nakagawa S: Neurochemistry International. 2009, Morofuji Y: Cel Mol Neurobiol.2010）を応用し、ニューロンを共培養することでBBB/Neurovascular unitモデルを作成した。(a)初代培養脳毛細血管内皮細胞：２－３週齢ラット（マウス）単離培した。Puromycinを用いることにより内皮細胞の純度をほぼ100％にすることに成功した。(b)初代培養ペリサイト：同様に２－３週齢ラットより単離培養した。ペリサイトは内皮細胞を単離する操作の過程で単離。(c)初代培養アストロサイト：１－２日齢ラットよりshaking methodで単離培養した。(d)初代培養ミクログリア：１－２日齢ラットよりglial cell cultureとして培養したのちに単離培養した。(e)初代培養ニューロン：胎生E18ラットより大脳皮質を採取し、細胞を分離させ単離培養した。単離細胞を(f)Neurovascular unitモデル：多孔質（0.4μm, 3.0μm pore size）の半透膜をもつ立体培養皿（Transwell）を用い共培養モデルを作成を試みているが、初代培養ニューロンの成長が難しく、共培養モデルとして確立できていない。また既製の初代培養神経細胞を用いて同様の手法を用いて共培養モデルの作成を検討している。