Development of plastics upcycling technology using fungal polyester-degrading system

利用真菌聚酯降解系统开发塑料升级回收技术

• 批准号: 19K12410
• 负责人: 井上 宏之
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19K12410/
• 关键词: 脂肪族ポリエステル分解; タラロマイセス・セルロリティカス; プラスチック分解処理; セルラーゼ生産糸状菌; エステラーゼ; ポリカプロラクトン; ポリヒドロキシ酪酸; クチナーゼ; プラスチック分解; 脂肪族ポリエステル; 糸状菌; バイオマス分解

本研究では、植物分解性の糸状菌が本来備えているポリエステル分解システムを解明し、その機能をベースにしたプラスチック分解処理の基盤技術を開発することを目的としている。高いセルラーゼ生産能を有するTalaromyces cellulolyticusを対象に、セルロースおよび脂肪族ポリエステルを炭素源として誘導分泌されるタンパク質群の中から、ポリエステル分解酵素の探索を行った。種々の脂肪族ポリエステルを炭素源として得られた培養液を評価した結果、ポリヒドロキシ酪酸（PHB）を用いて得られた培養上清液において、PHB分解活性が確認された。分子量の異なる２種類のPHB分解酵素を精製し、LC-MS/MS分析によるゲル内タンパク質同定を行った結果、両酵素は同一遺伝子由来であり、Talaromyces funiculosusで同定済みのPHB分解酵素と非常に高い相同性を示すことが明らかとなった。他方、セルロース炭素源とした培養上清液からは、ポリカプロラクトン（PCL）を分解する活性が確認され、リグノセルロース分解に関わる酵素群の関与が予想された。PCL分解酵素の精製に先立ち、PCLの分解によって生じるカルボキシル基末端を2-ニトロフェニルヒドラジンでラベル後に定量する簡易アッセイ法を確立した。本アッセイ法を用いて酵素を精製し、最終的に２種類の推定クチナーゼ及び１種類の推定ペクチンエステラーゼを同定した。さらにゲノム情報に基づいてこれらの遺伝子をクローニングし、T. cellulolyticusを宿主に用いて組換え酵素の大量生産に成功した。本研究で同定された３種のエステラーゼは、いずれもTalaromycesにおいて初めてPCL分解活性が確認された酵素であり、今後の機能解析によって、植物分解性の糸状菌が本来備えているポリエステル分解システムの解明が期待される。

This study aims to develop the basic technology of plant decomposition process by analyzing the original preparation of plant decomposition process and its function. The study of Talaromyces cellulolyticus as a target enzyme for high molecular weight production and for carbon source induction and secretion. The results of the evaluation of the fatty acid (PHB) in the culture medium were confirmed. The molecular weights of two different PHB enzymes were purified, and LC-MS/MS analysis showed that they had the same molecular weight and identity, and that the PHB enzymes had the same molecular weight and identity. The activities of enzymes involved in the decomposition of other carbon sources in culture supernatant were identified and analyzed. A simple method was established for the purification of PCL decomposing enzyme, the production of PCL decomposing enzyme, and the quantification of PCL decomposing enzyme. This method uses enzymes to refine and determine the final 2 kinds of putative enzymes and 1 kinds of putative enzymes. The information in the base of the file is transmitted to the server. Cellulyticus was successfully mass-produced by using the recombinant enzyme. In this study, we identified three kinds of phytotrophic bacteria, including Talaromyces, and expected to identify the enzyme activity and functional analysis of phytotrophic bacteria.