HCV特異的な細胞性免疫の抑制を解除するC型肝炎治療ワクチンの作用機序解明

阐明丙型肝炎治疗疫苗释放 HCV 特异性细胞免疫抑制的作用机制

• 批准号: 18K07159
• 负责人: 大槻 貴博
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K07159/
• 关键词: 治療ワクチン; HCV; C型肝炎; 細胞性免疫賦活化; T細胞活性化; 免疫抑制解除

我々はこれまでにC型肝炎の病態を示すHCVトランスジェニックマウスへのHCV構造蛋白質CN2または非構造蛋白質N25を発現するDNAワクチンまたは組換えワクチニアワクチン(rVV)とのDNA/rVV heterologous prime-boost接種により、炎症性サイトカイン産生M2マクロファージ減少による肝臓病態正常化と、HCV抗原に起因する細胞性免疫抑制を解除し再賦活化することで非細胞傷害性にウイルス抗原を排除できることを明らかにした。しかし、ワクチン接種により細胞性免疫抑制解除に関与する既知および未知の免疫細胞集団は不明である。そこでワクチン接種後の肝臓内白血球（IHL）中を免疫細胞集団の動態を包括的１細胞解析（Nx1-seq法）する事で、宿主内でどのような変化が起きたかを解析した。コントロール群と比べてワクチン接種群に優位な差は認められなかったが、N25-DNA/rVV-CN2群では血清中のALTが正常値レベル近くまで減少した。N25-DNA primingしたN25-DNA/rVV-CN2群、N25-DNA/rVV-N25群では肝臓中炎症性サイトカイン（IL-1b, IL-6）が抑制されておりM-CSFも減少していたことから、肝臓内への単球遊走、マクロファージの分化、増殖が阻害されることで、炎症細胞浸潤抑制とT細胞活性化抑制が示唆された。N25-DNA/rVV-CN2群でのみRANTES、MIP-1aが減少していることから、肝臓内へのT細胞、マクロファージ、好中球遊走が抑制され、肝臓の病態正常化が示唆された。実際にHE染色により肝臓の病理解析を行ったところ、肝臓中サイトカインおよび血清中ALTの定量結果と概ね相関していた。現在Nx1-seq解析を進めている。得られたデータから免疫細胞毎に有意に増減した遺伝子を選別し、細胞性免疫の抑制解除に関与する因子を同定する。

The HCV constitutive protein CN2 and the HCV non-constitutive protein N25 were detected by DNA sequencing and DNA/rVV heterogenous prime-boost inoculation. The HCV constitutive protein CN2 and the HCV non-constitutive protein N25 were detected by DNA sequencing and DNA/rVV heterogenous prime-boost inoculation. The HCV constitutive protein CN2 and HCV non-constitutive protein HCV antigen causes cellular immunosuppression to be removed and reactivated, and non-cellular immunosuppression to be eliminated. Immunization is related to the release of cellular immunosuppression and unknown immune cell populations. The dynamics of immune cell populations in liver leukocytes (IHL) after vaccination include 1-cell analysis (Nx1-seq method). The N25-DNA/rV-CN2 group showed a decrease in ALT in serum. N25-DNA priming, N25-DNA/rVV-CN2 and N25-DNA/rVV-N25 groups inhibited inflammatory cytokines (IL-1b, IL-6) in the liver, decreased M-CSF levels, hepatic cell migration, differentiation, proliferation inhibition, inflammatory cell infiltration inhibition, and T cell activation inhibition. The N25-DNA/rV-CN2 cluster showed a decrease in RANTES, MIP-1a, T cells in the liver, inhibition in the liver, and pathological normalization of the liver. The results of pathological analysis of liver tissue by HE staining and quantitative analysis of ALT in serum were generally correlated. Now Nx1-seq analysis is in progress. The immune cells are intentionally reduced, the genes are selected, and the factors related to the release of cellular immunity are determined