CD1aを介した脂質抗原提示と皮膚炎惹起メカニズム

CHILD症候群モデルマウス(K5-Cre-NSDHL+/--CD1a-tg)の作成表皮特異的NSDHLコンディショナルノックアウトマウス(K5-Cre-NSDHLflox)の作成 マウスES細胞にNSDHLターゲッティングベクターをエレクトロポレーションにて導入し、コロニーのピックアップを行った。ES細胞のスクリーニング後、胚盤胞 (BALB/c)への注入を行い、NSDHLキメラマウスを作成した。ES細胞(毛が黒色)とホスト胚(BALB/c)(アルピノ)とのキメラF1マウス(♂)と、B6(黒色)マウ スと交配し、黒色のF2マウス♀5匹について、ジェノタイピングを行った。キメラマウスの尾からCica GeneusトータルDNAプレップキットを用いてDNAを抽出し た。ターゲットベクターを挟むように数カ所primerを設定してPCRを行い、ジェノタイプを確認した。さらにNSDHLキメラマウスとK5-Creを掛け合わせてNSDHL変 異を持つK5-Cre-NSDHLfloxを作成し、表皮特異的にNSDHLをノックアウトした。表皮特異的NSDHLコンディショナルノックアウトマウスの皮膚にモザイク状に脱毛 を伴うphenotypeが見られ、3匹のマウスについてその部位の皮膚を生検して、皮膚のHE染色を行った。脱毛部では表皮の菲薄化と毛包構造の消失があり、一方で 有毛部では、皮膚炎を想起させる角質層の錯角化を認めた。今後、これらの組織についてNSDHLの発現を免疫染色で確認し、Western blotにてNSDHLの発現量の定量を行う。また、ガスクロマトグラフィーにてコレステロール代謝物の定量を行う。また、研究成果を国際学会にて発表し、論文として投稿予定。

CHILD症候群モデルマウス(K5-Cre-NSDHL+/--CD1a-tg)の作成表皮特異的NSDHLコンディショナルノックアウトマウス(K5-Cre-NSDHLflox)の作成 マウスES細胞にNSDHLターゲッティングベクターをエレクトロポレーションにて導入し、コロニーのピックアップを行った。ES細胞のスクリーニング後、胚盤胞 (BALB/c)への注入を行い、NSDHLキメラマウスを作成した。ES細胞(毛が黒色)とホスト胚(BALB/c)(アルピノ)とのキメラF1マウス(♂)と、B6(黒色)マウ スと交配し、黒色のF2マウス♀5匹について、ジェノタイピングを行った。キメラマウスの尾からCica GeneusトータルDNAプレップキットを用いてDNAを抽出し た。ターゲットベクターを挟むように数カ所primerを設定してPCRを行い、ジェノタイプを確認した。さらにNSDHLキメラマウスとK5-Creを掛け合わせてNSDHL変 異を持つK5-Cre-NSDHLfloxを作成し、表皮特異的にNSDHLをノックアウトした。表皮特異的NSDHLコンディショナルノックアウトマウスの皮膚にモザイク状に脱毛 を伴うphenotypeが見られ、3匹のマウスについてその部位の皮膚を生検して、皮膚のHE染色を行った。脱毛部では表皮の菲薄化と毛包構造の消失があり、一方で 有毛部では、皮膚炎を想起させる角質層の錯角化を認めた。今後、これらの組織についてNSDHLの発現を免疫染色で確認し、Western blotにてNSDHLの発現量の定量を行う。また、ガスクロマトグラフィーにてコレステロール代謝物の定量を行う。また、研究成果を国際学会にて発表し、論文として投稿予定。