母乳に含まれるビタミン候補物質ピロロキノリンキノンの高感度分析法の開発とその応用

母乳中维生素候选物质吡咯喹啉醌高灵敏度分析方法的建立及其应用

• 批准号: 18K11059
• 负责人: 熊澤 武志
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Seirei Christopher University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K11059/
• 关键词: ピロロキノリンキノン; 母乳; 抽出法; 質量分析; 質量分析法; 固相抽出法; MS法

本年度は以下の検討を行った。これまでの研究では、ヒト母乳中のピロロキノリンキノン（PQQ）を抽出する方法として、固相抽出法（SPE）および液-液抽出法による試料の前処理法を検討してきたが、本年度はヒト母乳を分析試料に用いる前段階として、市販の人工乳を用いた抽出法と超高速液体クロマトグラフィー-タンデム質量分析-選択反応モニタリング（LC-MS/MS-SRM）法を組み合わせたPQQ抽出試料の分析法の開発を検討した。抽出法ではイオン交換樹脂カートリッジカラムを用い、LC-MS/MS-SRM法ではネガティブイオンモード条件下でのプリカーサイオンとプロダクトイオン（カルボキシ基の開裂）の組み合わせによる高感度分析法を酢酸アンモニウム溶液とアセトニトリルの逆相カラムリニアグラジエント法において実施した。その結果、イオン交換樹脂カートリッジカラムを用いたSPE法では、抽出効率は60～70％程度、還元剤を試料（人工乳）に添加し抽出操作することでSRM法のバックグランドノイズの低減が確認されたほか、PQQの溶出時間の延長を伴うマトリックス効果の現象が見られた。また、今回の分析条件ではPQQの代謝物であるグリシンアダクトの抽出を同じ条件下で同時に行うことが可能であり、SRM法に適したプロダクトイオンの検出も可能であることが確認できた。本検討では、これまでの研究結果に改良を加えることができ、イオン交換樹脂を用いたSPE法と逆相カラムを用いたLC/MS/MS-SRM法との組み合わせは、母乳中PQQの高感度分析に関して有用の方法であることが明らかとなった。

This year, the following measures were taken. This research is aimed at the study of sample pretreatment methods for the analysis of human milk samples by solid phase extraction (SPE) and liquid-liquid extraction (PQQ). The development of analytical method for extraction of artificial milk samples from market by LC-MS/MS-SRM was investigated. The extraction method, LC-MS/MS-SRM method, and the high sensitivity analysis method are used for the preparation of the resin mixture. As a result, the SPE method was used to determine the extraction efficiency of 60~70%, and the SRM method was used to determine the decrease in the extraction efficiency of the sample (artificial milk). The extension of the dissolution time of PQQ was accompanied by the phenomenon of extraction efficiency. The analytical conditions for PQQ metabolites were determined simultaneously under the same conditions. The SRM method was applied to the determination of PQQ metabolites. This paper discusses the results of the study on the improvement of SPE method and LC/MS/MS-SRM method for high sensitivity analysis of PQQ in breast milk.