高速液体クロマトグラフィー/質量分析計によるキノコ毒アマニチンの分析

高效液相色谱/质谱法分析蘑菇毒鹅膏菌素

• 批准号: 07770323
• 负责人: 熊澤 武志
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770323/
• 关键词: キノコ毒; アマニチン; 高速液体クロマトグラフィー; 質量分析計; 固相抽出法

本研究では、アマニタ属キノコの有毒成分であるα-アマニチンの人体試料からの抽出法と高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による分析条件を設定し、HPLC/エレクトロスプレーイオン化(ESI)-質量分析計(MS)による検出を行った。HPLC装置は島津製LC-10AをMS装置はフィニガンマット製TSQ7000を使用した。カラムはWakosil II 5C18HG(長さ250mm、内径4.6mm、粒径5μm)を用いた。移動相は0.02M酢酸アンモニウム-アセトニトリル(7:3, pH5)で、流量は1ml/分(EIS-MSの場合は0.3ml/分)とした。ヒト全血および尿1mlにα-アマニチン標準品50μgを添加し、蒸留水を全血には9ml、尿では4mlを加え撹拌した後、Sep-Pak C_<18>カートリッジにゆっくり通す。1%酢酸水溶液20mlでカートリッジを洗浄し、5mlのクロロホルム/メタノール(6:4)溶液でα-アマニチンを溶出させる。この溶液を窒素気流下にて蒸発乾固を施し、残渣を1mlの移動相で溶解した後、その20μlをHPLCに供した。α-アマニチンを303nmでモニターしHPLC検出を行ったところ、全血および尿抽出試料では不純ピークが検出されたが、α-アマニチンのピークとの重複は問題にならなかった。回収率は全血で約43%、尿で約60%であった。次に、MS装置のインターフェイスとして高速原子衝撃法、大気圧イオン法およびESI法にてα-アマニチンの検出を試みたところ、ESIインターフェイスの場合が最も検出感度が高かった。ESI-MSによるα-アマニチンのスペクトルではm/z919の擬分子イオンがベースピークとなった。検出限界は全血および尿において、それぞれ50ng/mlおよび38ng/mlであった。今回の結果から、ヒト全血および尿からのα-アマニチンの分析にはSep-Pak C_<18>カートリッジによる抽出と、HPLC/EIS-MSによる検出が良好であることが明らかとなった。現在、固相抽出法の回収率の改善を検討しており、高感度で定量性に優れた分析方法の確立を目指すと共に、法医実際例への応用を試みる予定である。

In this study, the method of extracting toxic ingredients from the キノコのtoxic ingredients of アマニタであるα-アマニチンのhuman specimens and the high-speed liquid クロマトグラフィー (HP LC) analysis conditions are set, HPLC/ESI (ESI)-mass analyzer (MS) is used. The HPLC device was LC-10A manufactured by Shimadzu, and the MS device TSQ7000 manufactured by Shimadzu Corporation was used.カラムWakosil II 5C18HG (length 250mm, inner diameter 4.6mm, particle size 5μm) is used. The mobile phase is 0.02M ammonium anhydride-acetylinate (7:3, pH5), and the flow rate is 1ml/min (for EIS-MS, it is 0.3ml/min).ヒトwhole blood urine 1ml にα-アマニチン standard 50μg added を, distilled water をwhole blood 9ml, urine 4ml をadded え撹mixed した, Sep-Pak C_<18>カートリッジにゆっくり通す. 1% anhydrous acid aqueous solution 20ml でカートリッジをwashed, 5ml のクロロホルム/メタノール(6:4) solution is the solution of α-アマニチンを. The solution was drained, steamed to dryness, and the residue was dissolved in 1 ml of mobile phase, and then 20 μl of the residue was added to HPLC. α-アマニチンを303nmでモニターしHPLC検行を行ったところ, whole blood urine extraction test The material is impure, the material is not pure, and the problem is repeated. The recovery rate is about 43% in whole blood and about 60% in urine. High-speed atomic impact method for MS equipment, high-speed atomic impact method for MS equipment, and ESI method for large-scale pressure ionization method -アマニチンの検出をtrialみたところ、ESIインターフェイスのoccasionが最も検出sensitivityが高った. ESI-MSによるα-アマニチンのスペクトルではm/z919の pseudomolecule イオンがベースピークとなった.検出 limitはwhole blood urineにおいて、それぞれ50ng/mlおよび38ng/mlであった. This time's results, から, ヒトwhole blood, urine, からのα-アマニチンのanalysis, にはSep-Pak C_<18> カートリッジによる出と, HPLC/EIS-MS による検出が好であることが明らかとなった. At present, the recovery rate of the solid-phase extraction method has been improved, the high sensitivity and quantitative analysis method has been established, and the forensic analysis method has been tested and determined.

项目成果

Takeshi Kumazawa: "Level of pyrroloquinoline quinone in various foods" Biochemical Journal. 307. 331-333 (1995)

Takeshi Kumazawa：“各种食品中吡咯喹啉醌的含量”生物化学杂志。