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脱パルミトイル化によるシナプス局所領域の維持機構とその生理的意義の解明

阐明去棕榈酰化突触局部区域的维持机制及其生理意义

基本信息

批准号：
18K14707
负责人：
平田哲也
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

パルミトイル化は脂質によるタンパク質の翻訳後修飾の一つであり、可逆的な修飾である。シナプス後部のタンパク質であるPSD95はZDHHC2によりパルミトイル化され、ABHD17A, 17B, 17Cにより脱パルミトイル化される。本研究ではPSD95のパルミトイル化、脱パルミトイル化のサイクルの生理機能を明らかにするために、脱パルミトイル化酵素であるABHD17の性状解析を行なった。これまでに、内在性のABHD17を感度良く検出できる抗体が得られておらず、研究の大きな障壁となっていた。内在性のABHD17Bを検出するために、まずABHD17BにEGFPまたはHAタグを付加したノックインマウスを作出した。ノックインマウスの脳抽出液を用い、抗GFP抗体及び抗HA抗体を用いたウエスタンブロットを行なった結果、それぞれのタグが融合されたABHD17Bを検出することができた。すなわち、内在性のABHD17Bを感度良く検出することが可能となった。次に、ABHD17Bの脳内発現分布を調べるために、ノックインマウスの脳切片を用いた免疫染色を行った。その結果、ABHD17Bは脳の広い領域に発現することが明らかとなった。特に海馬において、ABHD17Bはニューロピル様の染色像を示したことから、シナプスに局在する可能性が示唆された。ノックインマウス由来培養神経細胞を用いた蛍光多重染色でも、ABHD17Bがシナプスのマーカーと共局在することが示された。これらの結果は、内在性のABHD17BがPSD95を基質とし得ることを示している。さらに、ABHD17Bの機能制御分子や新規基質タンパク質を同定するために、ノックインマウス脳を用いた免疫沈降を行った。その結果、ABHD17Bの局在制御分子の候補や新規基質候補分子が同定された。

In order to change the fat, the fat is changed, the fat is changed, and the refurbishment is made. In the back of the car, there is a problem of PSD95, ZDHHC2, etc., ABHD17A, 17B, 17C, and so on. The purpose of this study is to analyze the characteristics of enzyme enzyme, enzyme ABHD17, enzyme enzyme, ABHD17, enzyme, enzyme, ABHD17, enzyme, enzyme and ABHD17. The sensitivity of internal ABHD17 antibody is good, and the antibody is detected. The barrier is studied. The internal ABHD17B sends out the data, ABHD17B the EGFP, the HA, the payoff, the price, the price. The results showed that the extractive fluid was used, anti-GFP antibodies and anti-HA antibodies were used. The results were compared with the results of the fusion of ABHD17B antibodies and anti-HA antibodies. There is a good sense of internal ABHD17B, and it is possible to have a bad feeling. In the second and ABHD17B sections, immunostaining was used to observe the distribution of tumor cells. The results of the test show that ABHD17B has a significant impact on the field. Special attention is paid to the possibility that the staining image shows that the possibility is not clear. The reason for this is that the cells are stained with multiple light, and the ABHD17B cells are displayed in the same place. The results show that the results of the internal ABHD17B PSD95 system show that the data are not valid. The new rules and regulations can be controlled by the mechanism of ABHD17B and so on. The results show that the ABHD17B bureau is in the process of preparing the new standard for molecular waiting.