テーラーメイドのがん免疫治療に向けた新しい細胞傷害性T細胞測定法の確立

建立一种测量细胞毒性 T 细胞的新方法，用于定制癌症免疫治疗

• 批准号: 18K15430
• 负责人: 高木 徹
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Saitama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K15430/
• 关键词: 細胞傷害性T細胞; フローサイトメトリー; FACS; がん; CTL; 細胞傷害性試験; テーラーメイド治療

研究の目的は、ヒト固形がんのほぼすべてに発現しているがん抗原WT1 に着目し、WT1特異的CTLを用いた細胞傷害性試験を行い、同時に免疫チェックポイン ト 分子の発現を確認し、そのデータがテーラーメイド医療に繋げることができるかどうかを明らかにすることである。今年度はHLA-A24について検討を行った。既に作製済みであったHLA-A24を発現する標的細胞に、GFPを発現するベクターを導入した。GFP発現細胞をセルソーターで採取しクローニングして、HLA-A24/GFP発 現標的細胞を作製した。その後、HLA-A24トランスジェニックマウスをAd-M1で免疫し、1 週間後に脾臓を摘出して脾リンパ球をプライマリーCTLとして用いて、HLA-A2と同様の実験を行い、HLA-A24についても問題なく測定できることを確認した。次に換えアデノウイルス (Ad-WT1)を、HLA-A2、もしく はHLA-A24トランスジェニックマウスに免疫した。免疫後1週間で脾臓を摘出し、脾リンパ 球をプライマリーエフェクターCTLとして使用した。標的細胞には各HLA型に合うWT1由来ペプチドをパルスしたものを使用した。まずPI染色を用いて、このCTLが抗原特異的にGFP 発現標的細胞を傷害するかどうかを、フローサイトメトリーで測定した。さらにアポトーシスのマーカーであるAnnexin-VとCaspase-3の測定を行った。

The aim of this study was to identify the presence of the WT1 antigen and to test the cytotoxicity of WT1-specific CTL, to confirm the presence of immune molecules, and to clarify the medical implications of these studies. This year's HLA-A24 test was conducted. The target cells for HLA-A24 expression and GFP expression were introduced into the system. GFP-producing cells were isolated from HLA-A24/GFP-producing cells using a variety of technologies. After treatment, HLA-A24 was isolated from Ad-M1, and the immune response was confirmed after 1 week. The next step is to protect yourself from infection by using Ad-WT1, HLA-A2, and HLA-A24. One week after immunization, the spleen was extracted and the spleen was released. The target cell is a WT1 gene. PI staining was used to detect the damage of antigen-specific GFP expressing cells. Annexin-V and Caspase-3 were detected.

项目成果

Identification of HLA-A*02:01-restricted CTL epitopes derived from ORF1a polyprotein of SARS-CoV-2

鉴定源自 SARS-CoV-2 ORF1a 多蛋白的 HLA-A*02:01 限制性 CTL 表位

• 发表时间: 2020
• 作者: Masanori Matsui;Akira Takagi
• 通讯作者: Akira Takagi