骨髄腫幹細胞の同定とその生物学的・分子生物学的解析

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多発性骨髄腫の再発および治療抵抗性に関与する腫瘍内不均一性の解明を目指して、まず既報を参考に策定した分画に患者骨髄検体を細分化し、フローサイトメトリー（FCM）を用いた細胞分取およびbulk RNA sequencingに基づくＢ細胞受容体レパトア解析を行った。この結果に基づいて樹立した新規FCMパネルを用いて、診断時から治療後検体までの様々な時相の患者骨髄検体（n=11）から骨髄腫細胞を網羅的かつ選択的に分取し、single-cell RNA sequencingおよびsingle-cell VDJ targeted sequencingを行った。本手法により高精度な腫瘍細胞集団の描出を実現し、bulk RNA sequencingとの統合解析を行うことで細胞表面のCD138発現程度に沿った不均一性の存在が明らかになった。FCMによる患者骨髄検体の解析（n=59）でもCD138陰性骨髄腫細胞の存在が確認され、陽性細胞とは異なる形態・ヒストン修飾・細胞周期の傾向を呈していた。興味深いことに、治療前後の検体間における比較をした結果、CD138陰性集団の一部に治療抵抗性が示唆される特徴的なクラスターを見出した。今後は、同様の手法を用いて単一細胞解析による評価を重ねつつ、本クラスターが特性獲得に至る機序の詳細な検討を進めていく。CRISPR-Cas9スクリーニング、公共データベース（MMRF CoMMpass Study）の解析、免疫不全マウスへの移植実験ならびに阻害薬の投与実験など多方面からの検討を統合することで、根治を目指した治療標的としての可能性を提示する。