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血液循環腫瘍DNAに注目した肢端型・粘膜型メラノーマのバイオマーカーの探索

寻找肢端和粘膜黑色素瘤的生物标志物，重点关注循环肿瘤 DNA

基本信息

批准号：
18K16054
负责人：
境澤香里
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-01 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18K16054/
关键词：
肢端型・粘膜型メラノーマ KIT copy number variation circulating tumor DNA メラノーマ CDK4 CCND1

项目摘要

①肢端型・粘膜型メラノーマ切除検体の免疫染色と遺伝子解析：当科で切除された肢端型・粘膜型メラノーマの切除検体（原発巣・転移巣）のKIT、CDK4、CCND1免疫染色を行い、染色性の有無を調べた。対象となったのは27例で原発巣と転移巣は合わせて41検体だった。41検体の免疫染色の結果、KIT陽性は19検体、CDK4陽性は20検体、CCND1陽性は25検体だった。KIT免疫染色に着目すると、19検体の陽性検体のうち、Immunoreactive score(IRS)が(+++)だったのは9検体だった。次に、切除検体のパラフィン包埋ブロックからDNA抽出を行いSanger法で遺伝子変異の有無を解析した。KIT遺伝子変異の検索では3例に変異を認めた（K642E、L576P、D816H）。3例はいずれもKIT免疫染色のスコアが(+++)だった。②ddPCRを用いたCopy number（CN）ratioの解析：抽出したDNAを用いてKIT、CDK4、CCND1のCN ratioを調べた。正常組織のCN ratioの上限となるカットオフ値は確立していないため、対象とした症例の正常組織（HE染色でメラノーマ細胞を認めない部分）からDNAを抽出して3つの遺伝子のCN ratioを調べた。そして特異度100%となるような正常組織の上限値をカットオフ値と設定し、そのカットオフ値よりもCN ratioが高値である場合をCN alterationとした。KIT変異のあった3例のCN ratioは3.83、4.93、5.69といずれも上昇を認めた。さらにKIT免疫染色で(+++)だった例についてKIT遺伝子のCN ratioを検討し、CDK4、CCND1遺伝子のCN ratioについても検討した。③血漿の保存：circulating tumor DNAの解析に備え27症例の血漿を保存した。

(1) Immunostaining analysis of the body of limb-type mucous type mummification: the immunostaining of KIT, CDK4 and CCND1 was performed by immunostaining of KIT, CDK4 and CCND1. There were 27 cases in which the original symptoms were moved and 41 cases were closed. The results of immunostaining of 41 bodies, 19 bodies of KIT, 20 bodies of CDK4, and 25 bodies of CCND1. KIT immunostaining showed eye contact, 19 body sex, Immunoreactive score (IRS) (+ +) and 9 (body weight). The second time, the removal of the body, the body, the body and the body. 3 cases of KIT were diagnosed with clinical symptoms (K642E, L576P, D816H). KIT immunostaining was performed in 3 cases. 2ddPCR parses with "Copy number (CN) ratio": extract "DNA" with "KIT, CDK4, CCND1" CN ratio "analyze". In the normal tissue, the upper limit of the CN ratio, the upper limit of the normal tissue, the upper limit of the normal The normal organization has a high temperature of 100%. The normal organization has an upper limit of normal organization. This is not true of the normal organization. The settings and settings of the normal organization are similar to those of the normal organization. This is true of the normal organization. This is not true of the normal organization. This is true of the normal organization. This is not true of the normal organization. This is true for the normal organization. This is true for the normal organization. This is not true for the normal organization. This is true for the normal organization. The 3 cases of KIT were confirmed by CN ratio 3.83,4.93,5.69 respectively. KIT immunostaining (+) for example: KIT immunostaining, CN ratio immunostaining, CDK4, CCND1 immunostaining, CN ratio immunostaining, CN ratio immunostaining, and so on. 3Blood preservation: circulating tumor DNA analysis of 27 cases of blood preservation.