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Aufbau eines modularen Systems zur zeitaufgelösten Einzelmolekül/Enzymdetektion (FCS)

时间分辨单分子/酶检测（FCS）模块化系统的构建

基本信息

批准号：
387637964
负责人：
金额：
--
依托单位：
Technische Universität Dortmund
依托单位国家：
德国
项目类别：
Major Research Instrumentation
财政年份：
2017
资助国家：
德国
起止时间：
2016-12-31 至无数据
项目状态：
未结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/387637964?language=en
关键词：
Aufbau eines modularen Systems zur

项目摘要

Ziel des Antrags ist der Aufbau eines vielseitigen und modularen optischen Systems zur Detektion von Einzelmoleküleigenschaften in weichen Grenzflächen. Im Vordergrund steht dabei die Kopplung zwischen Grenzflächenzustand und katalytischer Aktivität einzelner Enzyme, d.h. inwieweit die Fluktuationen der Umgebung (Mikroenvironment) die Proteinfunktion bestimmen. Das System wird mit verschiedenen vorhandenen Oberflächentechniken (Akustische Oberflächenwellen, Langmuir-Trog, etc.) kombiniert, um Enzyme in Membranen (Lipidbilayern und -monolagen) zu untersuchen. Es soll ein breites, ausbaufähiges Spektrum an Einzelmoleküleigenschaften wie Photon counting, Polarisation, Lebenszeiten, etc. untersucht werden können. Zur Messung einzelner katalytischer Ereignisse sind SPADs mit hoher Quanteneffizienz notwendig. Die Untersuchungen zur Zustandsbestimmung erfordern zeitaufgelöste Messungen mit sehr kurzen Totzeiten und hohen Zählraten. Das Lasersystem muss sowohl gepulst als auch im cw-Mode betrieben werden können, um Rotationsdiffusionsmessungen zu ermöglichen. Zur Lokalisation von Proteinen in der Membran wird ein geeignetes Mikroskop benötigt. In Zukunft sollen außerdem Messungen an Zellmonolayern durchgeführt werden (àImaging/Scanning) und mehrere Einzelmolekülparameter sollen simultan bestimmt werden. Dazu ist eine einfache Erweiterbarkeit des Systems auf 4 bzw. 8 Detektoren sowie weitere Laser unbedingt erforderlich. Die technischen Anforderungen werden nur vom beantragten System erfüllt.

Ziel des Antrags is der Aufbau eines vielseitigen und modularen optischen Systems zur Detektion von Einzelmoleküleigenschaften in weichen Grenzflächen. In Vordergrund steht dabei die Kopplung zwischen Grenzflächenzustand und katalytischer Aktivität einzelner Enzymes，d.h.在微环境中，蛋白质的功能是最好的。Das System wird mit verbedenen vorhandenen Oberflächentechniken（Akustische Oberflächenwellen，Langmuir-Trog，etc.）复合膜中的酶（脂质双层和单层）。这是一个简单的、高光谱的光学仪器，如光子计数、偏振、生命周期等。这些都是韦尔登测量的结果。测量一个分解Ereignisse是SPAD，它具有更高的量子效率。Die Untersuchungen zur Zustandsbestimmung erfordern zeitaufgelöste Messungen mit sehr kurzen Totzeiten und hohen Zählraten.该激光系统也必须在连续模式下进行韦尔登校准，以确保旋转扩散。膜中蛋白质的局部化将是一个很好的方法。在Zukunft sollen außerdem Messungen an Zellmonolayern durchgeführt韦尔登（成像/扫描）和mehrere Einzelmolekül参数sollen simultan bestimmt韦尔登中。大足是一个4亿人的系统工程。8.使用激光进行检查。技术上的进步韦尔登仅仅来自于系统的失败。