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タイトジャンクションの形成機構の解明

阐明紧密连接的形成机制

基本信息

批准号：
17J00211
负责人：
重富健太
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、前年度までに明らかにしたタイトジャンクション領域に多く存在するコレステロールや炭素数２０以上の極長鎖脂肪酸鎖を有するスフィンゴミエリンがタイトジャンクションの形成にどのように関与しているかを調べた。そこで、タイトジャンクションを消失した細胞における脂質の局在や脂質組成を調べることで、タイトジャンクション領域の脂質がClaudinを集積させ、タイトジャンクションの形成に至っているのか、または、脂質の集積がClaudinを集積させ、タイトジャンクションの形成を誘導しているのか、手がかりを得ようと考えた。タイトジャンクションは複数のClaudinアイソフォームが集積して形成されている。そのため、一つのClaudinアイソフォームを欠損しても、タイトジャンクションの構造は維持されたままである。そこで、すべてのClaudinアイソフォームを欠損した上皮細胞株を樹立することにした。CRISPR-Cas9法を用いた遺伝子編集によって、すべてのClaudinを欠損したClaudin null細胞の樹立に成功している。現在、Claudin null細胞での細胞膜脂質の局在や脂質組成の変化を解析中である。また、前年度までに行っていたアドヘレンスジャンクションの必須構成タンパク質であるα-cateninを欠損したα-catenin KO細胞を利用したタイトジャンクション形成機構の解析に関しても、新たな知見を得ることができた。タイトジャンクションの形成には、アドヘレンスジャンクションの形成が先立って必要である。これまでに、アドヘレンスジャンクションの形成による細胞膜脂質の局在の変化がタイトジャンクションの形成を誘導することを報告してきたが、細胞骨格の配向性等の変化もタイトジャンクションの形成に必要であるという予備的なデータを得つつあるので、その点に関しても検討を進めていきたい。

This year, compared with the previous year, there were many problems in the field of fatty acid chain, such as carbon number of more than 20, and the formation of fatty acid chain was adjusted. The lipid composition of the cells is regulated by the accumulation of Claudin, the formation of Claudin and the induction of Claudin. The number of Claudin's software solutions is increasing. The structure of Claudin's computer system is still intact. The cells were cultured in vitro. CRISPR-Cas9 method was successfully used to compile Claudin null cells. Now Claudin null cell membrane lipid analysis in the lipid composition of the analysis In the past year, the alpha catenin KO cells have been used to form a mechanism for analysis. The shape of the image is necessary for the formation of the image. This paper reports that the formation of cell membrane lipid structure in the formation of cell membrane lipid structure.