犬移行上皮癌の発がん・進展全機構の解明と新規治療法の開発

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本年度も前年度に引き続き、犬移行上皮癌(cTCC)におけるBRAF遺伝子変異の意義を①細胞の生存・増殖と②COX2/PGE2の過剰産生を介した炎症環境の構築という2つの観点から研究を実施した。①に関しては、前年度にcTCCはBRAF阻害剤に対し初期耐性を示すことが示唆されたため、本年度はその獲得メカニズムの探索を行った。化合物ライブラリを用いた検討により、10種の薬剤でBRAF阻害剤との併用により相乗的な細胞生存率の低下を認めた。またそのうちの多くは、BRAFの属するMAPK経路の上流に位置する特定の分子を標的とする薬剤であった。よって、cTCCにおけるBRAF阻害剤に対する初期耐性の獲得には、今回明らかとなった分子を介したMAPK経路の再活性化やバイパス経路の活性化が重要であることが示唆された。②に関しては、前年度の結果をより一般化するために、BRAF変異保有cTCC細胞株6株を用いて同様の評価を行った結果、COX2/PGE2を過剰発現していなかった細胞株を除いた5株において、COX2/PGE2発現が同様に抑制された。以上のことから、BRAF遺伝子変異によるMAPK経路の活性化はcTCCにおけるCOX2/PGE2の過剰発現に重要であることが示唆された。また、前年度の結果からcTCCにおけるCOX2/PGE2発現への関連が示唆されたp38/JNK経路についても、in vitroでの検討を行った。結果として、p38/JNKの阻害剤はそれぞれcTCC細胞株のPGE2産生を抑制したが、p38阻害剤はCOX2発現も抑制する一方で、JNK阻害剤はCOX2発現を亢進することが明らかになった。またMAPK経路の活性化には影響しなかったことから、p38/JNK経路はBRAF変異によるMAPK経路の活性化とは異なるメカニズムによりCOX2/PGE2発現を制御していることが示唆された。