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タンパク質のバルクリン酸化とその水和効果から理解する分裂期染色体構築機構

从蛋白质大量磷酸化及其水合效应了解有丝分裂染色体组装机制

基本信息

批准号：
17J09002
负责人：
山崎啓也
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、分裂期移行に伴う染色体関連タンパク質のバルクリン酸化の役割を、DNAとタンパク質が高濃度で存在する環境における、リン酸基周辺の水和効果から解明することにある。採用第3年目の本年は、研究項目3「in vitroクロマチン再構成におけるリン酸化タンパク質のバルク効果の検証」を行った。Ki-67の分裂期における機能へのバルクリン酸化の影響の検証Ki-67は、rRNAや核小体タンパク質で構成される分裂期染色体周縁部の構築に必須のタンパク質である。分裂期染色体周縁部は、染色体一つ一つの独立性を保つことに寄与していることが報告されている。さらには、染色体周縁部は液相ではないかと示唆されてきた。前年までの結果より、Ki-67が分裂期バルクリン酸化タンパク質であり、その分裂期バルクリン酸化がKi-67のin vitroにおける液相の形成に重要であることがわかった。本年度はまずKi-67のバルクリン酸化の効果をin vivoで検証した。Ki-67の変異体を用いた解析により、Ki-67が分裂期リン酸化を受けることで染色体周縁部を構築し、それによって染色体の異常な凝集を防いでいることがわかった。最後に、液相形成による染色体周縁部in vitro再構成を試みた。この解析から、Ki-67の分裂期バルクリン酸化が液相形成を促進する役割を持つとともに、Ki-67のDNA結合能によって液相形成可能な程度まで分子の局所濃度が上昇するメカニズムが示唆された。これらの結果から、分裂期移行に伴う染色体関連タンパク質のバルクリン酸化が、液－液相分離の原理を通じて分裂期染色体構築に寄与していることが明らかになった。

In this study, chromosome migration was associated with high concentrations of DNA and DNA in the environment, water and fruit in the acid cycle. This year's research project 3,"In vitro reconstruction, in vitro acidification, in vitro quality, in vitro quality." A study of the effects of Ki-67 on the function of mitotic acid during mitotic phase and the structure of the chromosome cycle during mitotic phase Chromosome cycle, chromosome one, chromosome one, In the middle of the chromosome, the chromosome is divided into two parts. The results of the previous year showed that Ki-67 was important for the formation of liquid phase in vitro. This year, Ki-67 was tested in vivo. Ki-67 gene expression analysis, Ki-67 gene expression in mitotic phase, chromosome cycle construction, chromosome abnormal aggregation prevention Finally, the chromosome cycle is reconstructed in vitro. The analysis of Ki-67 showed that the cleavage phase of Ki-67 was increased by acidification, the formation of liquid phase was promoted, the DNA binding energy of Ki-67 was increased, and the concentration of molecular site was increased. The result of this study is that the mitotic phase transition is accompanied by chromosome correlation, and the principle of liquid-liquid phase separation is communicated with the mitotic phase chromosome construction.