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ＨＳＶ－１感染細胞の核膜において膜融合を引き起こす実行因子の同定

鉴定导致 HSV-1 感染细胞核膜融合的执行因子

基本信息

批准号：
18J13075
负责人：
前田史雄
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18J13075/
关键词：
単純ヘルペスウイルス膜融合 CRISPR-Cas9 HSV

项目摘要

本研究ではヘルペスウイルス感染細胞に特徴的な現象である、カプシドの小胞媒介性核外輸送機構に関して、核膜間のウイルス粒子と核外膜の膜融合を引き起こす宿主因子の探索を目的に研究を行った。2018年度では、質量解析法によるUL31/UL34複合体と相互作用する宿主因子の探索およびCRISPR/Cas9システムとイメージングを組み合わせたスクリーニングを実施し、核膜におけるウイルスエンベロープと核外膜の膜融合への関与が示唆される宿主因子(X)が示された。2019年度ではスクリーニングから示された宿主因子に対して、詳細な解析を行った。解析の結果、(1)HSV-1感染細胞において宿主因子Xは核膜に局在すること、またHSV-1 UL34と相互作用することが示された。(2)Cas9および宿主因子Xを標的としたgRNAを細胞に一過的に発現させ、遺伝子欠損細胞を作製した。欠損細胞にHSV-1を感染させたところ、核膜間におけるウイルス粒子の異常蓄積が認められられた。この異常蓄積は核膜間におけるウイルス粒子と核外膜の膜融合が阻害された結果、生じたと考えられる。従って、宿主因子Xが膜融合に関与していることが示唆された。

The aim of this study is to explore the mechanism of microcell-mediated nuclear transport, the initiation of nuclear particle fusion and host factors in the process of identifying the characteristics of infected cells. In 2018, mass analysis method was used to explore host factor of UL31/UL34 complex and interaction. CRISPR/Cas9 complex and interaction mechanism were combined to implement host factor (X) analysis. In 2019, the host factor was analyzed in detail. The results of the analysis are as follows: (1)HSV-1 infected cells are infected with host factor X, and HSV-1 UL34 interacts with host factor X. (2)Cas9 and host factor X target the expression of gRNA in cells and control the expression of gRNA in cells. The abnormal accumulation of HSV-1 particles in damaged cells is recognized. The abnormal accumulation of nuclear particles in the outer membrane of the nucleus results in the inhibition of nuclear fusion. The host factor X is a membrane fusion factor.