ASXL1 effect on RNA splicing

ASXL1 对 RNA 剪接的影响

• 批准号: 18J13055
• 负责人: 山本 圭太
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18J13055/
• 关键词: 骨髄異形成症候群; エピジェネティクス; ASXL1; スプライシング; NONO

当研究室ではASXL1-MTKIマウスを作製し、その機能解析を行っている。変異型ASXL1がスプライシングに与える影響を調べるため、ASXL1-MTKIマウスの造血幹・前駆細胞（HSPCs）を用いてRNA-seqを行った。シーケンスの結果、ASXL1ノックインマウスとコントロールマウスの間に遺伝子発現と選択的スプライシングに変化が見られた。また、パラスペックル形成に重要な役割を担うNEAT1によって調整される遺伝子群の発現が優位に低下していることが明らかになった。変異型ASXL1がスプライシングに影響を及ぼすメカニズムを解明するため、ASXL1による免疫沈降の質量分析データを解析し、ASXL1が転写やスプライシング、パラスペックル形成に関与する核内RNA結合蛋白のNONOと結合することを見出した。遺伝子導入を行った細胞株293Tにおいて、実際にASXL1とNONOが結合することを共免疫沈降実験により確認した。また、変異型ASXL1を発現した293T細胞ではNONOとNEAT1との結合が低下することが明らかになり、変異型ASXL1がスプライシングパターンを変化させるメカニズムとして、パラスペックル複合体との関係性が変化する可能性が考えられた。ASXL1-MTKIマウスのHSPCsではパラスペックルが破綻していることが、Neat1のRT-qPCRおよびRNA-FISHの結果から明らかになった。CRISPR/Cas9トランスジェニックマウスを用いた造血幹細胞移植実験では、Nonoノックアウトにより移植後の造血再構築能が低下することが明らかとなった。総括として、本年度の研究から変異型ASXL1がスプライシングに変化を起こしていること、そしてそのメカニズムの一端が明らかとなった。

ASXL1-MTKI is a functional analysis tool. ASXL1-MTKI-1 Hematopoietic Stem Cells (HSPCs) ASXL1 is the result of the selection process. In addition, it is necessary to adjust the occurrence of genetic subgroup in NEAT1 to improve the quality of genetic subgroup. ASXL1 has been shown to be involved in the formation of NONO binding to nuclear RNA binding proteins. Cell line 293T was successfully transfected with ASXL1 and NOI. ASXL1 is found in 293T cells, and the association between NONO and NEAT1 is reduced. ASXL1-MTKI's HSPCs are the result of RT-qPCR and RNA-FISH. CRISPR/Cas9 can be used in hematopoietic stem cell transplantation. This year's study focuses on ASXL1, which is a heterogeneous system.

项目成果

Mutant ASXL1 Disrupts Paraspeckle Formation through Aberrant Interaction with NONO in Hematopoietic Cells

突变体 ASXL1 通过与造血细胞中 NONO 的异常相互作用破坏副斑形成

• 发表时间: 2019
• 作者: Mohammad Rasel Mian;Louis R Redfern;Saied Md Pratik;Debmalya Ray;Jian Liu;Karam B Idrees;Timur Islamoglu;Laura Gagliardi;Omar K Farha;山本圭太
• 通讯作者: 山本圭太