ASXL1 effect on RNA splicing

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当研究室ではASXL1-MTKIマウスを作製し、その機能解析を行っている。変異型ASXL1がスプライシングに与える影響を調べるため、ASXL1-MTKIマウスの造血幹・前駆細胞（HSPCs）を用いてRNA-seqを行った。シーケンスの結果、ASXL1ノックインマウスとコントロールマウスの間に遺伝子発現と選択的スプライシングに変化が見られた。また、パラスペックル形成に重要な役割を担うNEAT1によって調整される遺伝子群の発現が優位に低下していることが明らかになった。変異型ASXL1がスプライシングに影響を及ぼすメカニズムを解明するため、ASXL1による免疫沈降の質量分析データを解析し、ASXL1が転写やスプライシング、パラスペックル形成に関与する核内RNA結合蛋白のNONOと結合することを見出した。遺伝子導入を行った細胞株293Tにおいて、実際にASXL1とNONOが結合することを共免疫沈降実験により確認した。また、変異型ASXL1を発現した293T細胞ではNONOとNEAT1との結合が低下することが明らかになり、変異型ASXL1がスプライシングパターンを変化させるメカニズムとして、パラスペックル複合体との関係性が変化する可能性が考えられた。ASXL1-MTKIマウスのHSPCsではパラスペックルが破綻していることが、Neat1のRT-qPCRおよびRNA-FISHの結果から明らかになった。CRISPR/Cas9トランスジェニックマウスを用いた造血幹細胞移植実験では、Nonoノックアウトにより移植後の造血再構築能が低下することが明らかとなった。総括として、本年度の研究から変異型ASXL1がスプライシングに変化を起こしていること、そしてそのメカニズムの一端が明らかとなった。