NR4aを用いたT細胞の疲弊解除

使用 NR4a 逆转 T 细胞耗竭

• 批准号: 22KJ2710
• 负责人: 中川原 賢亮
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2710/
• 关键词: 腫瘍免疫; CAR-T細胞; 肺癌; T細胞の疲弊; 代謝

本年度において、T 細胞疲弊の調節因子として知られる NR4a に着目し、NR4a をノックアウトした CAR T 細胞を作成し、フローサイトメトリーにて疲弊化に関連する細胞表面マーカーの測定、in vitro でのがん細胞との共培養後の killing assay モデルによる抗腫瘍効果の検討を行った。上記試験管モデルでの実験により、NR4a ノックアウト CAR T 細胞の高い抗腫瘍効果を実証し、年度の中盤からはNSGマウスを用いて、マウスモデルにおけるNR4a ノックアウトCAR T細胞の抗腫瘍効果を評価した。同実験系においてもNR4a ノックアウト CAR T 細胞は強い抗腫瘍効果を示すことが明らかになった。またNR4a ノックアウト CAR T 細胞の代謝能に関しても、Flux analysis、Mito Trackerを用いて評価を行い、NR4a ノックアウト CAR T 細胞は、ミトコンドリアの活性化と活性酸素の発現上昇、酸化的リン酸化の亢進による強いATP産生能を有する事を実証した。同CAR T 細胞の RNA シークエンスの解析でも、NR4a ノックアウト CAR T 細胞はミトコンドリア関連遺伝子の発現上昇、memory phenotype に関連する遺伝子の発現亢進を認めた事に加え、癌細胞との共培養後の RNA シークエンスでは、IFN-γに関連するpathwayの亢進と疲弊関連遺伝子の発現低下を認め、これまでの研究と矛盾しない結果を確認した。今後はシングルセルRNAシークエンスを行い、NR4a ノックアウト CAR T 細胞の遺伝子発現を詳細に評価することに加え、NR4a がミトコンドリアに及ぼす影響とその関連遺伝子について研究を継続する予定である。成果報告として昨年末に、第51 回日本免疫学会学術集会での筆頭演者でのポスター発表と学内講演を行った。

在今年，我们专注于NR4A，NR4A是T细胞疲劳的调节剂，并创建了将NR4A击落的CAR T细胞，并测量了与流式细胞术相关的细胞表面标记，并使用杀伤测定模型与癌细胞培养物与体外癌细胞后使用杀伤测定法研究了抗肿瘤效应。上述试管模型中的实验表明NR4A敲除CAR T细胞具有很高的抗肿瘤作用，并且从财政年度中期，使用NSG小鼠来评估小鼠模型中NR4A敲除CAR T细胞的抗肿瘤效应。还发现NR4A敲除CAR T细胞在同一实验系统中表现出强大的抗肿瘤作用。此外，使用通量分析和Mito Tracker评估NR4A基因敲除CAR T细胞的代谢潜力，并证明NR4A基因敲除CAR T细胞具有强大的ATP生产能力，这是由于线粒体激活，增加活性氧的表达增加，氧化磷酸化的增加。除了分析CAR T细胞的RNA序列外，NR4A基因敲除CAR T细胞还显示出与线粒体相关基因的表达增加，并且与记忆表型相关基因的表达增加，并且在与癌细胞共培养后的RNA序列中，结果与先前的研究一致。将来，我们计划进行单细胞RNA测序，以详细评估NR4A敲除CAR T细胞中的基因表达，并继续研究NR4A对线粒体及其相关基因的影响。为了报告结果，去年年底，领先的发言人介绍了海报演讲，并在日本免疫学协会第51届学术会议上进行了校园演讲。

项目成果

日本人COVID-19患者におけるトシリヅマブ使用症例の臨床的特徴の検討

日本 COVID-19 患者托珠单抗使用案例的临床特征检查

• 发表时间: 2022
• 作者: Mise-Omata;S.;M. Ikeda;M. Takeshita;Y. Uwamino;M. Wakui;T. Arai;A. Yoshifuji;K. Murano;H. Siomi;K. Nakagawara;M. Ohyagi;M. Ando;N. Hasegawa;H. Saya;M. Murata;K. Fukunaga;H. Namkoong;X. Lu;S. Yamasaki;and A. Yoshimura.;Kensuke Nakagawara;中川原賢亮;中川原賢亮
• 通讯作者: 中川原賢亮

Memory B Cells and Memory T Cells Induced by SARS-CoV-2 Booster Vaccination or Infection Show Different Dynamics and Responsiveness to the Omicron Variant

• DOI: 10.4049/jimmunol.2200525
• 发表时间: 2022-12-01
• 期刊: JOURNAL OF IMMUNOLOGY
• 影响因子: 4.4
• 作者: Mise-Omata, Setsuko;Ikeda, Mari;Yoshimura, Akihiko
• 通讯作者: Yoshimura, Akihiko

Antitumor efficacy of NR4a knock out HER2 CAR-T cell therapy for solid tumors

NR4a敲除HER2 CAR-T细胞疗法治疗实体瘤的抗肿瘤功效

• 发表时间: 2022
• 作者: Mise-Omata;S.;M. Ikeda;M. Takeshita;Y. Uwamino;M. Wakui;T. Arai;A. Yoshifuji;K. Murano;H. Siomi;K. Nakagawara;M. Ohyagi;M. Ando;N. Hasegawa;H. Saya;M. Murata;K. Fukunaga;H. Namkoong;X. Lu;S. Yamasaki;and A. Yoshimura.;Kensuke Nakagawara
• 通讯作者: Kensuke Nakagawara

COVID-19と細菌感染合併症例の臨床的特徴の検討

COVID-19临床特征及细菌感染并发症的检查

• 发表时间: 2022
• 作者: Mise-Omata;S.;M. Ikeda;M. Takeshita;Y. Uwamino;M. Wakui;T. Arai;A. Yoshifuji;K. Murano;H. Siomi;K. Nakagawara;M. Ohyagi;M. Ando;N. Hasegawa;H. Saya;M. Murata;K. Fukunaga;H. Namkoong;X. Lu;S. Yamasaki;and A. Yoshimura.;Kensuke Nakagawara;中川原賢亮
• 通讯作者: 中川原賢亮