遺伝子組換え技術と遺伝子発現の理解のための参加型公開実験ワークショップ手法の研究

了解基因重组技术和基因表达的参与式开放实验研讨会方法研究

• 批准号: 26560111
• 负责人: 渡辺 裕文
• 金额: $ 2.16万
• 依托单位: National Institute of Agrobiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26560111/
• 关键词: シロアリ; 唾液腺; セルラーゼ; 無細胞発現系; 遺伝子組換え; 組換え生産; 体験; ウサギ網状赤血球; ｃDNA

ヤマトシロアリ(Reticulitermes speratus)ワーカーを材料として唾液腺セルラーゼの無細胞発現系を構築した。すなわちヤマトシロアリワーカー（働きアリ）全虫体よりオリゴｄTセルロースによるアフィニティ法によりｍRNAを精製し、これを鋳型として第１アンカー配列を5’端に接続したオリゴｄTプライマーと第２アンカー配列を5’端に接続したスイッチングテンプレートを加えたMMLV由来逆転写酵素系によるfirst strand cDNA合成をおこなう。得られたｍRNAを鋳型としてヤマトシロアリ唾液腺セルラーゼ（GenBank AB008778）の成熟タンパクゴード領域のN末端に特異的塩基配列の5’端にウサギ網状赤血球無細胞発現系での発現に必要な転写開始配列を加えたプライマーおよびC末端特異的塩基配列および終止コドンの相補配列によるプライマー間で唾液腺セルラーゼｃDNAを特異的に増幅し、それを鋳型としてウサギ網状赤血球無細胞系でヤマトシロアリ唾液腺セルラーゼが発現する系を構築した。唾液腺セルラーゼの発現はシロアリ内源性セルラーゼに特異的な抗血清による免疫反応とセルラーゼ活性の両方で確認した。（以上平成２６年度研究成果、２７年度は研究費の申請自粛、２８年度は研究課題の廃止により実施していない）

Reticulitermes speratus: A cell-free development system for salivary glands The first strand of cDNA was synthesized from the first strand of cDNA. The gene expression of the mRNA was detected by PCR.(GenBank AB008778) The N-terminal specific nucleotide sequence of the mature cDNA of the N-terminal region of the cDNA library and the 5 '-terminal specific nucleotide sequence of the cDNA library of the salivary gland are necessary for the development of a reticulocyte cell-free development system. A new type of reticulocyte cell-free system was constructed. The development of salivary glands and the identification of endogenous and specific antisera and immune responses (Research results of Heisei 26, application for research fee of Heisei 27, research project of Heisei 28)