mutans streptococciのグルカン合成酵素を用いた齲蝕ワクチンの開発

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昨年度の計画では、プラスミドの複製起点に着目し、宿主菌体中のプラスミドのコピ-数を増加させることによりm-RNAの転写量の増加すなわち遺伝子産物の発現量の増加を計り、効率の高いワクチン原の精製を確立する予定であった。Escherichia coliとStreptococcus mutans間のシャトルベクタ-であるpVA856による形質転換が比較的容易であったS.mutansを宿主菌として、E.coliの原理に基づいて、プラスミドの複製起点の調節を行なったが、コピ-数を増加させることはできず、gtf-B遺伝子産物の過剰産生変異株を作成することはできなかった。また、宿主菌として、その染色体遺伝子にS.mutansのgtf-B遺伝子およびS.sobrinusのgtf-Id遺伝子のいずれとも相同部分を持たず、さらにmutans streptococciと分泌機構が類似しているS.sanguisを用いて実験を行なったが、S.sanguisの形質転換は実現できなかった。しかしながら、S.sanguisの形質転換は理論的には可能であるので、今後さらに研究を続けてS.sanguisの形質転換を成功させる予定である。S.sanguisに関する一連のデ-タより、形質転換が実現できれば、gtf-Bおよびgtf-Id遺伝子産物の菌体外への分泌は成功すると考えられる。今後は、S.sanguisを宿主菌として、両遺伝子のプロモ-タ-部分の修飾あるいはプラスミドの複製起点の調節により、菌体外画分から多量の不溶性グルカン合成酵素を精製し、本研究を工業レベルまでもっていく予定である。