前立腺癌オルガノイドを用いた癌幹細胞性転写超保存領域の探索と治療への応用

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本検討では前立腺癌オルガノイドを用いた癌幹細胞性、転写超保存領域の同定およびその機能解析を目的として解析をおこなった。5症例の前立腺癌オルガノイドと正常前立腺オルガノイドをサンプルに以前に前立腺癌で発現の上昇の報告を認めた26領域のTUCRについてｑRT-PCRで発現を解析し、前立腺癌オルガノイドで発現の上昇しているT-UCRを同定した。さらに前立腺癌、非癌部をサンプルに同様にｑRT-PCRで解析し、両者で発現の上昇を認めたUc.3+を同定した。Uc.3+についての報告はこれまで全く認められない。前立腺癌細胞株C4-2、22Rv-1を用いて、Uc.3＋の強制発現株を作成した。オルガノイドは幹細胞性を維持する環境であり、Uc.3+が幹細胞性に関与すると考え、幹細胞マーカーとしてALDH1、CD44の発現を見たところ、Uc.3＋強制発現株において上昇していた。スフェロイドアッセイをおこなったところ、Uc.3+強制発現株においてスフェロイドのサイズが亢進した。Uc.3+の機能解析をさらにすすめるためにsiRNAを用いてUc.3+を標的にノックダウンをこころみた。qRT-PCRでUc.3+がノックダウンされたことを確認した。Uc.3+をノックダウンさせると強制発現とは逆にALDH1、CD44の発現が減弱し、さらにスフェロイドのサイズが減弱した。現在、Uc.3+の強制発現株を用いてRNAシークエンスを行い、その結果を解析しているところである。