Application of proteomic analysis to newborn screening for primary immunodeficiency

2019年度には、京都大学医の倫理委員会に承認を得た研究計画書に従い、関連研究機関の保存検体や、自治体で新生児代謝スクリーニングに使用され保存されてあったろ紙血の収集を行い、原発性免疫不全症候群（PID）患者から採取したろ紙血32検体（新生児期検体5検体を含む）と健常コントロールろ紙血37検体（うち健常新生児期検体20検体）を解析候補検体として確保し得た。またろ紙血による質量分析の前処理として、ろ紙血中の可溶分画に豊富に含まれる蛋白を除去し膜蛋白を含む不溶分画を濃縮することで、免疫不全症の原因となるタンパク質の検出感度を大幅に上昇させる事ができた。このデータを元に、いくつかの内部標準蛋白の候補を設定し、家族性血球貪食性リンパ組織球症3型（FHL3)患者からのろ紙血9検体（発症時5検体、新生児期検体 4検体）と健常新生児検体10検体で疾患責任蛋白と内部標準蛋白の質量分析による発現評価を行ったところ、採取時期を問わず患者検体でのみ疾患責任蛋白の明らかな発現低下を認めた。FHL3患者の新生児期検体4検体では最大保存期間4年の検体もあったが、保存期間を問わず内部標準蛋白の発現量は健常新生児検体と同等であった。以上より、新生児期より質量分析によるFHL3疾患責任蛋白のろ紙血中での発現解析を用いて疾患スクリーニングが可能であることと、保存ろ紙血を用いても疾患スクリーニング解析が可能であることが示唆された。FHL3以外の免疫不全症に関しても適切な内部標準蛋白を選定し、精度・感度を向上させつつデータを集積していく方針としている。尚、上記成果に関しては第35回組織球症学会（Histiocyte society）にて報告し、ポスター賞であるArceci Prizeを受賞した。

2019年度には、京都大学医の倫理委員会に承認を得た研究計画書に従い、関連研究機関の保存検体や、自治体で新生児代謝スクリーニングに使用され保存されてあったろ紙血の収集を行い、原発性免疫不全症候群（PID）患者から採取したろ紙血32検体（新生児期検体5検体を含む）と健常コントロールろ紙血37検体（うち健常新生児期検体20検体）を解析候補検体として確保し得た。またろ紙血による質量分析の前処理として、ろ紙血中の可溶分画に豊富に含まれる蛋白を除去し膜蛋白を含む不溶分画を濃縮することで、免疫不全症の原因となるタンパク質の検出感度を大幅に上昇させる事ができた。このデータを元に、いくつかの内部標準蛋白の候補を設定し、家族性血球貪食性リンパ組織球症3型（FHL3)患者からのろ紙血9検体（発症時5検体、新生児期検体 4検体）と健常新生児検体10検体で疾患責任蛋白と内部標準蛋白の質量分析による発現評価を行ったところ、採取時期を問わず患者検体でのみ疾患責任蛋白の明らかな発現低下を認めた。FHL3患者の新生児期検体4検体では最大保存期間4年の検体もあったが、保存期間を問わず内部標準蛋白の発現量は健常新生児検体と同等であった。以上より、新生児期より質量分析によるFHL3疾患責任蛋白のろ紙血中での発現解析を用いて疾患スクリーニングが可能であることと、保存ろ紙血を用いても疾患スクリーニング解析が可能であることが示唆された。FHL3以外の免疫不全症に関しても適切な内部標準蛋白を選定し、精度・感度を向上させつつデータを集積していく方針としている。尚、上記成果に関しては第35回組織球症学会（Histiocyte society）にて報告し、ポスター賞であるArceci Prizeを受賞した。